体细胞核移植生产转ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1克隆猪 |
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作者姓名: | 潘登科 张莉 周艳荣 冯冲 龙川 刘晓 董恩球 王树臣 万荣 张健 陈红星 |
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作者单位: | ① 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 畜禽遗传资源与利用农业部重点实验室, 北京 100193; ② 军事医学科学院生物工程研究所, 北京 100071; ③ 河北省玉田种猪场, 玉田 064104; ④ 中国农业大学动物科技学院, 北京 100193 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划(批准号: 2006AA02Z113)、国家基本科研业务费(批准号: ywf-td-1)和中国农业科学院科技经费资助项目 |
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摘 要: | 转ω-3脂肪酸去饱和酶基因猪在优质猪培育及研究ω-3不饱和脂肪酸预防心血管和癌症疾病中的作用方面有着重大的应用.本研究首次通过体细胞核移植制备了转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1猪.将sFat—1基因转染到大白猪胎儿成纤维细胞,获得转基因阳性细胞克隆,然后以转基因细胞为核供体、体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎,胚胎体外培养或进行移植.先后移植了1889枚1-4细胞期克隆胚胎到10头受体母猪的输卵管内,28天B超检测9头受体母猪妊娠(90%),7头妊娠足月(70%)分娩产下21头仔猪,体细胞克隆猪的效率为1.1%(出生仔猪/移植胚胎).体细胞克隆猪效率的提高,主要是对克隆胚胎的移植环节进行了改进,比较了受体母猪排卵状况对胚胎移植效率的影响.当受体母猪卵泡发育处于即将排卵或正在排卵阶段,能够获得较高的妊娠率和妊娠足月率(100%),而排卵后移植妊娠足月率为0%.对健康存活15头克隆猪进行了PCR和Southern检测,证实13头为转基因猪,转基因阳性率为87%.RT—PCR检测13头转基因猪,12头表达sFat—1基因.以上结果表明,利用优化的体细胞转基因结合核移植技术,可以成功地批量生产转sFat-1基因的克隆猪.
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关 键 词: | 体细胞核移植 ω-3脂肪酸去饱和酶基因 排卵状况 转基因猪 |
收稿时间: | 2008-12-23 |
修稿时间: | 2009-02-24 |
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