| 新城疫病毒HN蛋白在水稻中的表达及半定量快速检测抗体方法的建立北大核心CSCD |
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| 引用本文： | 张申立,许倩茹,杨继飞,李青梅,孙亚宁,李雪洋,王雅楠,牛香香,屈小天,陈金炫,张二芹,张改平.新城疫病毒HN蛋白在水稻中的表达及半定量快速检测抗体方法的建立北大核心CSCD[J].生物工程学报,2022,38(5):1981-1993. |
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| 作者姓名： | 张申立 许倩茹 杨继飞 李青梅 孙亚宁 李雪洋 王雅楠 牛香香 屈小天 陈金炫 张二芹 张改平 |
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| 作者单位： | 河南农业大学 国家动物免疫学国际联合研究中心, 河南 郑州 450046;河南农业大学 动物医学院, 河南 郑州 450046;西北农林科技大学 动物医学院, 陕西 杨凌 712100;河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室, 河南 郑州 450002;吉林大学 动物医学院, 吉林 长春 130062;河南农业大学 国家动物免疫学国际联合研究中心, 河南 郑州 450046;河南农业大学 动物医学院, 河南 郑州 450046;河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室, 河南 郑州 450002 |
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| 基金项目： | 转基因生物新品种培育重大专项（2016ZX08001006-10）；河南农业大学校级项目（30601543） |
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| 摘 要： | 本研究旨在利用水稻胚乳生物反应器表达新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV) HN蛋白,建立一种NDV抗体半定量、快速免疫层析检测方法。通过MlyⅠ和XhoⅠ双酶切重组质粒pUC57-HN,NaeⅠ和XhoⅠ双酶切包含有启动子、信号肽和终止子的pMP3中间载体,分别回收HN和pMP3片段并进行连接,构成重组质粒pMP3-HN1。然后利用Eco RⅠ和HindⅢ双酶切pMP3-HN1和植物载体pCAMBIA1300,将HN1基因成功连接到pCAMBIA1300上,采用电转化方法将重组质粒pCAMBIA1300-HN1导入根癌农杆菌EHA105。通过农杆菌介导法将pCAMBIA1300-HN1转入水稻愈伤组织。经过暗培养、愈伤筛选、分化、生根和移栽,4个月后获得转基因水稻种子。经PCR鉴定,HN基因已插入到水稻基因组中。SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果表明,水稻胚乳成功表达了HN蛋白,且该蛋白通过SP阳离子层析和凝胶过滤层析,其纯度达到90%以上。根据国家制定的新城疫血凝抑制(hemagglutination inhibition, HI)试验诊断技术标准(HI≥4log2,检测的抗体为阳性),利用胶体金标记HN蛋白,通过双抗夹心法制备NDV抗体半定量快速检测试纸。结果显示:试纸与其他病毒的阳性血清无交叉反应,且试纸对新城疫标准阳性血清的敏感性可达到1︰102 400。根据308份临床血清的检测结果,NDV抗体试纸与和HI试验的符合率为97.08%,Kappa值为0.942。综上所述,获得了高纯度水稻胚乳表达的重组HN蛋白,并研制了一种简单、快速、灵敏度高、特异性强的半定量免疫层析试纸。该试纸能够初步应用于新城疫疫苗的免疫评价。
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| 关 键 词： | 新城疫 HN蛋白 胶体金 半定量试纸条 |
| 收稿时间： | 2021/8/20 0:00:00 |
Expression of NDV HN protein in rice and development of a semi-quantitative rapid method for detection of antibodies |
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| ZHANG Shenli,XU Qianru,YANG Jifei,LI Qingmei,SUN Yaning,LI Xueyang,WANG Yanan,NIU Xiangxiang,QU Xiaotian,CHEN Jinxuan,ZHANG Erqin,ZHANG Gaiping.Expression of NDV HN protein in rice and development of a semi-quantitative rapid method for detection of antibodies[J].Chinese Journal of Biotechnology,2022,38(5):1981-1993. |
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| Authors: | ZHANG Shenli XU Qianru YANG Jifei LI Qingmei SUN Yaning LI Xueyang WANG Yanan NIU Xiangxiang QU Xiaotian CHEN Jinxuan ZHANG Erqin ZHANG Gaiping |
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| Institution: | International Joint Research Center of National Animal Immunology, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450046, Henan, China;College of Veterinary Medicine, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450046, Henan, China;College of Veterinary Medicine, Northwest A&F University, Yangling 712100, Shaanxi, China;Key Laboratory of Animal Immunology, Henan Academy of Agricultural Sciences, Zhengzhou 450002, Henan, China;College of Veterinary Medicine, Jilin University, Changchun 130062, Jilin, China; International Joint Research Center of National Animal Immunology, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450046, Henan, China;College of Veterinary Medicine, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450046, Henan, China;Key Laboratory of Animal Immunology, Henan Academy of Agricultural Sciences, Zhengzhou 450002, Henan, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Newcastle disease HN protein colloidal gold semi-quantitative test strip |
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