| GL-7ACA酰化酶表达检测系统的建立 |
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| 引用本文： | 李祥, 张伟, 茅翔, 蔡煊, 杨蕴刘, 赵国屏, 姜卫红,.GL-7ACA酰化酶表达检测系统的建立[J].生物工程学报,2001,17(6):673-677. |
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| 作者姓名： | 李祥 张伟 茅翔 蔡煊 杨蕴刘 赵国屏 姜卫红 |
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| 作者单位： | [1]中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所,上海200032 [2]中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研 |
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| 基金项目： | 国家"863"计划资助项目(103-13-02-01). |
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| 摘 要： | 戊二酰－7－氨基头孢烷酸（GL－7ACA）酰化酶能够催化GL－7ACA分解生成7－ACA,后者是工业半合成生产头孢类抗菌素所需的重要前体。为了准确地检测GL－7ACA酰化酶及其突变体的表达,本研究通过构建一系列质粒载体,建立了两个简便有效地测定GL－7ACA酰化酶基因acy表达量的系统,从而可对酶的比活力进行定量。我们将两个报告基因,即儿茶酚双加氧酶基因（xylE)和β－半乳糖苷酶基因（lacZ)分别置于acy基因的下游,使之与acy基因共用一个启动子,进行串联表达,各自构成一个多顺反子系统。实验证明,基因融合后的儿茶酚双加氧酶或β－半乳糖苷酶的活力可以间接反映acy的表达量。
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| 关 键 词： | GL－7ACA酰化酶 表达 检测系统 头孢菌素类 抗生素 |
| 文章编号： | 1000-3061(2001)06-0673-05 |
| 修稿时间： | 2001年4月17日 |
Establishment of Detective Systems for GL-7ACA Acylase Expression |
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| LI Xiang ZHANG Wei MAO Xiang CAI Xuan YANG Yun-Liu,ZHAO Guo-Ping JIANG Wei-Hong.Establishment of Detective Systems for GL-7ACA Acylase Expression[J].Chinese Journal of Biotechnology,2001,17(6):673-677. |
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| Authors: | LI Xiang ZHANG Wei MAO Xiang CAI Xuan YANG Yun-Liu ZHAO Guo-Ping JIANG Wei-Hong |
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| Institution: | Institute of Plant Physiology and Ecology, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200032, China. |
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| Abstract: | Glutaryl-7-amino cephalosporanic acid (GL-7ACA) acylase catalyzes the conversion of GL-7ACA to 7-amino cephalosporanic acid (7-ACA). The product 7-ACA is a starting compound for semi-synthetic cephalosporin antibiotics in industry. In order to detect the expression and specific activity of protein-engineered GL-7ACA acylase accurately, two useful detective systems for its expression has been established, in which reporter genes xylE and lacZ were fused to the downstream the GL-7ACA acylase gene acy respectively and the activity of catechol dioxygenase or beta-galactosidase could indicate the amount of acy expression. |
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| Keywords: | GL-7ACA acylase expression detective system |
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