| 表达3-甾酮-△1-脱氢酶降解植物甾醇合成雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮 |
| |
| 引用本文： | 张乐乐,张显,邵明龙,陈榕榕,饶志明,李会,许正宏.表达3-甾酮-△1-脱氢酶降解植物甾醇合成雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮[J].生物工程学报,2015,31(11):1589-1600. |
| |
| 作者姓名： | 张乐乐 张显 邵明龙 陈榕榕 饶志明 李会 许正宏 |
| |
| 作者单位： | 1 江南大学生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122,1 江南大学生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122,1 江南大学生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122,1 江南大学生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122,1 江南大学生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122,2 江南大学药学院，江苏 无锡 214122,2 江南大学药学院，江苏 无锡 214122 |
| |
| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划 (973计划) (No. 2012CB725202), 国家高技术研究发展计划 (863计划) (No. 2011AA02A211), 国家自然科学基金 (No. 21276110), 中央高校基本科研业务费专项资金 (No. JUSRP51306A), 江苏高校优势学科建设工程项目资助。 |
| |
| 摘 要： | 构建分枝杆菌表达载体pMTac并在分枝杆菌Mycobacterium neoaurum JC-12中加强表达甾醇降解过程中的关键酶3-甾酮-△1-脱氢酶(KSDD)以提高雄甾-1,4-二烯-3,17-二铜(ADD)的产量。将p MF41的启动子pACE替换成tac启动子构建载体pMTac,在分枝杆菌中分别表达报告基因绿色荧光蛋白(GFP)和关键酶KSDD,通过GFP亮度和KSDD酶活验证tac启动子在M.neoaurum JC-12中的效果,并发酵验证加强表达KSDD对产物ADD的影响。荧光显微照片表明两个载体均能在M.neoaurum JC-12表达GFP,但tac启动子的效果比pACE强。酶活测定结果为重组菌M.neoaurum JC-12/pMTac-ksdd破碎细胞上清液中KSDD酶活比原始菌提高了6.53倍,比M.neoaurum JC-12/pMF41-ksdd提高了4.36倍。摇瓶发酵显示重组菌M.neoaurum JC-12/pMTac-ksdd ADD的产量比原始菌提高了22.2%,由4.86 g/L提高到5.94 g/L,而AD的产量由0.92 g/L减少到0.17 g/L,降低了81.5%;与M.neoaurum JC-12/p MF41-ksdd比,ADD产量提高了12.7%,AD降低了71.2%。以20 g/L植物甾醇为底物,5 L发酵罐中重组菌M.neoaurum JC-12/pMTac-ksdd的ADD产量达到10.28 g/L。结果表明,构建的新型表达载体pMTac适用于在M.neoaurum JC-12中加强表达关键酶KSDD,而且在M.neoaurum JC-12中过量表达KSDD有助于ADD产量的提高,为目前报道的发酵法利用新金色分枝杆菌降解植物甾醇合成ADD的最高水平。
|
| 关 键 词： | Mycobacterium neoaurum JC-12，3-甾酮-△1-脱氢酶，tac启动子，雄甾-4-烯-3 17-二酮，雄甾-1 4-二烯-3 17-二酮 |
| 收稿时间： | 2014/11/24 0:00:00 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《生物工程学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《生物工程学报》下载免费的PDF全文 |
|
