| G418和潮霉素B双重抗性小鼠胚胎干细胞饲养层的制备 |
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| 引用本文： | 张梅英,李华,董婉维,秦英,杨葳,王禄增,王太一.G418和潮霉素B双重抗性小鼠胚胎干细胞饲养层的制备[J].细胞生物学杂志,2005,27(2):206-210. |
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| 作者姓名： | 张梅英 李华 董婉维 秦英 杨葳 王禄增 王太一 |
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| 作者单位： | 中国医科大学实验动物部 沈阳110001
(张梅英，李华，董婉维，秦英，杨葳，王禄增)，中国医科大学实验动物部 沈阳110001(王太一) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(No.30070353)~~ |
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| 摘 要： | 通过脂质体转染的方法，先后将含有neo基因的质粒pWL／neo和含有潮霉素基因的质粒导入NIH3T3细胞中，利用G418和潮霉素B的药物选择特性，对转染细胞进行压力筛选，经500μg／ml的G418和300μg／ml潮霉素B压力筛选后，获得了具有G418和潮霉素B双重抗性细胞克隆。抗性NIH3T3细胞的形态和生长速度与正常NIH3T3细胞没有差异，用PCR法特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA，可以扩增出对应的核苷酸片段。生长在双抗NIH3T3细胞饲养层上ES细胞基本保持正常ES细胞特征，成功地培育了G418和潮霉素双重抗性的NIH3T3细胞，为进行pTet-on和pTRE-H-Insulin目的基因电转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选打下了基础。
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| 关 键 词： | 胚胎干细胞 饲养层细胞 NIH3T3细胞 G418 潮霉素B 脂质体转染 双重抗性小鼠 |
| 修稿时间： | 2004年3月22日 |
The Establishment of Both G418 and Hygromycin B Resistant NIH3T3 Cell Line as Feeder Layer for Mouse ES Cell Culture |
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| Mei-Ying Zhang,Hua Li,Wan-Wei Dong,Ying Qin,Wei Yang,Lu-Zeng Wang,Tai-Yi Wang.The Establishment of Both G418 and Hygromycin B Resistant NIH3T3 Cell Line as Feeder Layer for Mouse ES Cell Culture[J].Chinese Journal of Cell Biology,2005,27(2):206-210. |
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| Authors: | Mei-Ying Zhang Hua Li Wan-Wei Dong Ying Qin Wei Yang Lu-Zeng Wang Tai-Yi Wang |
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| Institution: | Mei-Ying Zhang*,Hua Li,Wan-Wei Dong,Ying Qin,Wei Yang,Lu-Zeng Wang,Tai-Yi Wang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | NIH3T3 cell transfection G418 resistance hygromycin B ES cell |
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