| 猪链球菌cAMP结合蛋白基因敲除株的构建及生物学特性 |
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| 引用本文： | 赵琳,胡丹,钟璟皓,李娟,龚秀芳,潘秀珍,王长军,陈建华.猪链球菌cAMP结合蛋白基因敲除株的构建及生物学特性[J].生物技术通讯,2015(2):164-169. |
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| 作者姓名： | 赵琳 胡丹 钟璟皓 李娟 龚秀芳 潘秀珍 王长军 陈建华 |
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| 作者单位： | 中国药科大学生命科学与技术学院;南京军区军事医学研究所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81471920,31170124,81172794);南京军区医学科技创新课题(ZX39);江苏省自然科学青年基金(BK20140096) |
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| 摘 要： | 目的:构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33 c AMP结合蛋白(CRP)编码基因敲除突变株及基因回复互补株,并探究CRP基因的缺失对细菌生物学特性及毒力的影响。方法:构建中间为壮观霉素抗性基因(Spcr)、两侧为CRP编码基因上下游同源序列的基因敲除质粒,通过同源重组筛选CRP编码基因敲除突变株ΔCRP;构建CRP编码基因的互补质粒,通过电转化敲除株ΔCRP,筛选CRP的基因回复互补株CΔCRP;比较分析突变株、野生株和回复互补株的基本生物学特征的差异,并以小鼠作为动物感染模型对突变株、互补株及野生株的毒力进行评估分析。结果:应用组合PCR和基因测序分析,证实构建了CRP的突变株ΔCRP,并筛选出CRP的回复互补株CΔCRP;逆转录PCR证实在突变株ΔCRP中CRP在转录水平缺失,而在回复互补株CΔCRP中其转录回复;在丰富营养情况下,突变株ΔCRP与野生株的溶血活性、生长速率及对小鼠的致病力均无显著性差异,但突变株的成链能力减弱。结论:CRP编码基因的缺失并未显著改变野毒株05ZYH33的基本生物学特性和毒力,提示CRP可能不是猪链球菌的关键毒力决定因子,其参与碳源代谢等功能有待进一步研究。
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| 关 键 词： | 猪链球菌 cAMP结合蛋白 突变株 互补株 毒力 |
Construction and Functional Analysis of cAMP Receptor Protein Knock-Out Mutant of Streptococcus suis Serotype 2 |
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| ZHAO Lin;HU Dan;ZHONG Jing-Hao;LI Juan;Gong Xiu-Fang;PAN Xiu-Zhen;WANG Chang-Jun;CHEN Jian-Hua.Construction and Functional Analysis of cAMP Receptor Protein Knock-Out Mutant of Streptococcus suis Serotype 2[J].Letters in Biotechnology,2015(2):164-169. |
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| Authors: | ZHAO Lin;HU Dan;ZHONG Jing-Hao;LI Juan;Gong Xiu-Fang;PAN Xiu-Zhen;WANG Chang-Jun;CHEN Jian-Hua |
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| Institution: | ZHAO Lin;HU Dan;ZHONG Jing-Hao;LI Juan;Gong Xiu-Fang;PAN Xiu-Zhen;WANG Chang-Jun;CHEN Jian-Hua;College of Life Science and Technolog, China Pharmaceutical University;Institute of Military Medical Sciences, Nanjing Command; |
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