| 家蚕微孢子虫海藻糖酶3的表达、定位及功能 |
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| 引用本文： | 张轶岭,李俊昊,宁嘉兴,Bismark KYEI,沈中元.家蚕微孢子虫海藻糖酶3的表达、定位及功能[J].昆虫学报,2020,63(6):727-734. |
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| 作者姓名： | 张轶岭 李俊昊 宁嘉兴 Bismark KYEI 沈中元 |
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| 作者单位： | (江苏科技大学生物技术学院, 江苏镇江 212018) |
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| 摘 要： | 【目的】本研究旨在初步明确家蚕微孢子虫Nosema bombycis海藻糖酶3(NbTre3)的功能,为家蚕Bombyx mori微粒子病的防治提供理论依据和线索。【方法】通过PCR扩增NbTre3,构建原核表达载体pET28a-NbTre3;经IPTG诱导在大肠杆菌Escherichia coli中表达重组蛋白NbTre3,Western blot检测目的蛋白;Ni柱亲和层析法对重组蛋白NbTre3进行纯化,用获得的NbTre3免疫新西兰兔制备多克隆抗体;利用间接免疫荧光技术对成熟家蚕微孢子虫中的NbTre3进行定位;qRT-PCR检测家蚕微孢子虫感染家蚕5龄起蚕后不同时间中肠中NbTre3的转录水平;通过分别注射siRNA-1, siRNA-2和siRNA-3进行RNAi,qRT-PCR检测RNAi后不同时间感染家蚕微孢子虫的家蚕5龄起蚕中肠中NbTre3和16S rRNA的转录水平。【结果】成功纯化并获得重组目的蛋白NbTre3,大小约为34 kD。免疫新西兰兔后,收集血清,纯化获得NbTre3多克隆抗体,经Western blot鉴定正确。间接免疫荧光结果显示NbTre3主要分布在成熟家蚕微孢子虫孢原质中。qRT-PCR结果表明,家蚕微孢子虫感染后6 h时家蚕5龄起蚕中肠中NbTre3的表达量最高;siRNA抑制NbTre3的表达后,家蚕微孢子虫16S rRNA的转录水平没有明显的变化。【结论】结果提示NbTre3可能在家蚕微孢子虫感染初期的发芽过程中发挥重要的作用。
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| 关 键 词： | 家蚕微孢子虫 海藻糖酶 原核表达 RNA干扰 qRT-PCR |
Expression,localization and function of trehalase 3 inNosema bombycis(Microsporidia) |
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| ZHANG Yi-Ling,LI Jun-Hao,NING Jia-Xing,Bismark KYEI,SHEN Zhong-Yuan.Expression,localization and function of trehalase 3 inNosema bombycis(Microsporidia)[J].Acta Entomologica Sinica,2020,63(6):727-734. |
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| Authors: | ZHANG Yi-Ling LI Jun-Hao NING Jia-Xing Bismark KYEI SHEN Zhong-Yuan |
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| Institution: | (College of Biotechnology, Jiangsu University of Science and Technology, Zhenjiang, Jiangsu 212018, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Nosema bombycis trehalase prokaryotic expression RNA interference qRT-PCR |
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