| 人源类溶菌酶蛋白6在毕赤酵母中的重组表达及活性分析 |
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| 引用本文： | 黄鹏,李文姝,谢君,鲍建瑛,曹晓娥,余龙,徐一新.人源类溶菌酶蛋白6在毕赤酵母中的重组表达及活性分析[J].中国生物工程杂志,2015,35(8):30-37. |
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| 作者姓名： | 黄鹏 李文姝 谢君 鲍建瑛 曹晓娥 余龙 徐一新 |
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| 作者单位： | 1. 上海健康医学院基础医学院 上海 200237;
2. 上海健康医学院药学院 上海 200237;
3. 上海纽约大学文理学部 上海 200122;
4 复旦大学遗传工程国家重点实验室 上海 200433 |
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| 基金项目： | 上海市自然科学基金(15ZR1421800)、上海市高校青年教师资助培养计划(PF-JZ-QT02022016)资助项目 |
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| 摘 要： | 利用毕赤酵母(Pichia pastoris)重组表达人源类溶菌酶蛋白6(human lysozyme-like protein6,h Lyzl6),对其酶学性质进行分析。根据毕赤酵母密码子偏爱性设计并人工合成h Lyzl6基因,将其连接至含有乙醇氧化酶启动子(AOX1)的p PIC9K质粒构建重组表达载体p PIC9K-hlyzl6;重组表达载体经线性化后电转化入毕赤酵母GS115感受态细胞,经G418筛选获得高拷贝重组菌株后进行甲醇诱导表达。经甲醇诱导72 h后发酵液上清中酶活性达到最高值,发酵液上清经SDSPAGE检测在14.8 k Da处有重组h Lyzl6蛋白条带,分子量符合预期,通过甲壳素亲和层析可对其进行纯化;采用比浊法测定h Lyzl6酶学活性,结果表明h Lyzl6对溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)有较好的杀灭作用,最适反应温度为40℃,最适p H为5.5,其酶活力为54 700U/mg,Cu2+对其活性有明显抑制,EC50为30.2799 mg/L。采用基因工程方法首次在毕赤酵母GS115成功表达了重组h Lyzl6,证实其在体外具有杀菌活性,初步揭示h Lyzl6在男性生殖系统先天性免疫中发挥了一定作用,为进一步研究h Lyzl6的功能和应用开发奠定了基础。
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| 关 键 词： | 人源类溶菌酶蛋白6 毕赤酵母 表达 杀菌活性 |
| 收稿时间： | 2015-07-10 |
Expression of Human Lysozyme-like Protein 6 in Pichia pastoris and Analysis of Enzymatic Activity of the Protein |
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| HUANG Peng,LI Wen-shu,XIE Jun,BAO Jian-ying,CAO Xiao-e,YU Long,XU Yi-xin.Expression of Human Lysozyme-like Protein 6 in Pichia pastoris and Analysis of Enzymatic Activity of the Protein[J].China Biotechnology,2015,35(8):30-37. |
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| Authors: | HUANG Peng LI Wen-shu XIE Jun BAO Jian-ying CAO Xiao-e YU Long XU Yi-xin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Human lysozyme-like protein 6 Pichia pastoris Expression Bactericidal activity |
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