| HCV core 1b 亚型和HA 共表达重组腺病毒载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 蒋丽娜李航谷雨叶菁,李青.HCV core 1b 亚型和HA 共表达重组腺病毒载体的构建与鉴定[J].现代生物医学进展,2011,11(1):8-11. |
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| 作者姓名： | 蒋丽娜李航谷雨叶菁 李青 |
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| 作者单位： | 第四军医大学基础部病理学与病理生理学教研室,陕西,西安,710032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金81000171/H0316 |
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| 摘 要： | 目的:构建HCV core 1b亚型和HA共表达的腺病毒载体并予以鉴定。方法:合成HCV核心蛋白1b亚型的核苷酸,连接入pcmv5-HA质粒中。用XhoⅠ单酶切,后用Klenow酶补平,再用HindⅢ单酶切下HA-HCV core 1b片段,连入pShuttle-cmv穿梭质粒中,构建穿梭质粒pShuttle-CMV-HA core 1b.将pShuttle-CMV-HA core 1b转化至含有AdEasy-1的BJ5183感受态细菌中进行同源重组。PacⅠ酶切线性化重组质粒pAd-HA-HCV core 1b并转染AD293细胞进行病毒包装和扩增。用RT-PCR检测HA-HCVcore 1b的mRNA的表达水平,并用Western blot检测融合表达蛋白HA-HCV core 1b的表达水平。结果:穿梭质粒pShuttle-CMV-HA-HCV core 1b经PCR和测序证实构建成功。重组腺病毒载体经AD293细胞包装后,可观察到CPE现象。用获得的重组腺病毒载体感染AD293细胞,经RT-PCR检测,在mRNA水平上有表达;经Western blot检测,HCV core 1b亚型腺病毒载体(Ad-HA-HCV core 1b)感染组与未感染腺病毒载体组及空白对照组相比,只有Ad-HA-HCV core 1b感染组有融合蛋白HA-HCVcore 1b的表达。结论:通过分子克隆体外重组技术,成功构建了HCV core 1b亚型和HA共表达的重组腺病毒载体Ad-HA-HCVcore 1b。为进一步研究丙型肝炎病毒1b亚型引起丙肝感染中胰岛素抵抗的作用机制提供了方法。
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| 关 键 词： | HCV core 1b亚型 重组腺病毒载体 分子克隆 |
Construction and Identification of Recombinant Adenovirus Vector
Co-expressing HCV Core 1b and HA* |
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| JIANG Li-n,LI Hang,GU Yu,YE Jing,LI Qing.Construction and Identification of Recombinant Adenovirus Vector
Co-expressing HCV Core 1b and HA*[J].Progress in Modern Biomedicine,2011,11(1):8-11. |
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| Authors: | JIANG Li-n LI Hang GU Yu YE Jing LI Qing |
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| Institution: | △(Pathology and Pathophysiology Department,Forth Military Medical University,Xi’an,710032,Shanxi,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | HA-HCV core 1b vector construction Recombinant adenovirus Molecular cloning |
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