| Etk敲除及过表达细胞株构建并探讨Etk对细胞增殖的影响 |
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| 引用本文： | 苏 宏,李 钊,刘婷婷,陈超飞,王 敏.Etk敲除及过表达细胞株构建并探讨Etk对细胞增殖的影响[J].现代生物医学进展,2020(5):801-807. |
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| 作者姓名： | 苏 宏 李 钊 刘婷婷 陈超飞 王 敏 |
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| 作者单位： | 中山大学附属第一医院转化医学中心 广东 广州 510000 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金重大研究计划培育项目（91539110） |
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| 摘 要： | 目的:利用CRISPR-Cas9技术在人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中构建Etk(Epithelial and endothelial tyrosine kinase)敲除稳定细胞株以及利用慢病毒构建Etk过表达稳定细胞株,并初步探讨Etk基因对HUVECs细胞增殖的影响。方法:利用CRISPR-Cas9技术,使用在线工具设计针对Etk的sgRNA (https://chopchop.rc.fas.harvard.edu/)。将sgRNA利用连接酶整合到病毒载体中,包被病毒并感染HUVECs敲除HUVECs中的内源性Etk。利用嘌呤霉素筛选得到Etk敲除的稳定细胞株。PCR扩增Etk基因序列,将其整合到pLEX-MCS慢病毒过表达载体中构建Etk过表达重组质粒。包被病毒并感染HUVECs,在HUVECs中过表达Etk,利用嘌呤霉素筛选得到Etk过表达的稳定细胞株。利用qRT-PCR和Western-Blotting检测Etk的敲除和过表达情况。利用CCK-8盒子检测两种稳定细胞株细胞增殖情况。结果:利用CRISPR-Cas9技术有效的敲除HUVECs中内源性Etk,同对照相比,Etk的mRNA和蛋白水平显著地降低(P0.01)。同时利用慢病毒在HUVECs中过表达Etk,同对照相比,在过表达Etk稳定细胞株中Etk的mRNA和蛋白表达显著上调(P0.01)。CCK-8检测发现,Etk敲除降低细胞增殖能力;而Etk过表达增加细胞增殖能力。结论:通过CRISPR-Cas9技术成功在HUVECs中敲除Etk,利用慢病毒过表达系统成功的在HUVECs中过表达Etk,并且初步验证了Etk促进HUVECs细胞增殖。
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| 关 键 词： | Etk CRISPR-Cas9敲除 慢病毒过表达 细胞增殖 |
| 收稿时间： | 2019/12/19 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2020/1/12 0:00:00 |
Construction of Etk Knockout and Overexpression Cell Strains and Investigation for the Effect of Etk on HUVECs Proliferation |
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| SU Hong,LI Zhao,LIU Ting-ting,CHEN Chao-fei,WANG Min.Construction of Etk Knockout and Overexpression Cell Strains and Investigation for the Effect of Etk on HUVECs Proliferation[J].Progress in Modern Biomedicine,2020(5):801-807. |
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| Authors: | SU Hong LI Zhao LIU Ting-ting CHEN Chao-fei WANG Min |
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| Institution: | Department of translational medicine, The First Affiliated Hospital Sun Yat-sen University, Guangzhou, Guangdong, 510000, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Etk CRISPR-Cas9 Knockdown Lentivirus overexpression Cell proliferation |
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