| 基于新的CRISPR/Cas9技术实现斑马鱼LHX9基因的快速编辑及对F0突变体性腺发育的初筛 |
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| 引用本文： | 王 楠,朱 惠,朱文娇,张昌润,沈也雷,董 梅,宋怀东,乔 洁.基于新的CRISPR/Cas9技术实现斑马鱼LHX9基因的快速编辑及对F0突变体性腺发育的初筛[J].现代生物医学进展,2020(1):14-18. |
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| 作者姓名： | 王 楠 朱 惠 朱文娇 张昌润 沈也雷 董 梅 宋怀东 乔 洁 |
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| 作者单位： | 上海交通大学医学院附属第九人民医院内分泌科 上海 200011;上海交通大学医学院附属第九人民医院中心实验室 上海 200011;上海市南洋模范中学 上海 200030 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（81570753，81873652） |
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| 摘 要： | 目的:CRISPR/Cas9系统在斑马鱼的反向遗传学中的到了广泛应用,但突变基因的表型观察往往需要在突变鱼系的F1中进行,费时较长。LHX9作为LIM家族的一种转录因子,在胚胎早期的泌尿生殖嵴中有广泛分布;且LHX9基因敲除的小鼠存在性腺发育不良。本研究拟通过一种新的CRISPR/Cas9基因编辑技术,采用四条sgRNA对LHX9基因进行VASA转基因斑马鱼的基因敲除,以观察该基因缺陷对斑马鱼性腺发育的影响。方法:利用新的CRISPR/Cas9技术,设计四条针对斑马鱼LHX9基因3号外显子的20bp的sgRNA,通过非克隆体外转录得到靶位点的四条sgRNA。将以上靶位点的四条sgRNA与Cas9核酸酶蛋白同时注射入单细胞期的斑马鱼胚胎内,利用PCR鉴定突变型类型和突变比例。通过对LHX9基因突变体的VASA转基因斑马鱼进行荧光观察,发现LHX9基因缺陷的斑马鱼性腺发育的情况。结果:靶向Exon 3的四条sgRNA可成功编辑斑马鱼LHX9基因,敲除效率高达82%,Sanger测序发现产生10种不同的移码突变类型。通过该方法对VASA转基因斑马鱼的LHX9基因进行编辑,发现LHX9基因突变导致dph6的的斑马鱼原始生殖细胞增殖和迁移受到影响。结论:基于4条sgRNA注射的CRISPR/Cas9技术,可以快速地产生具有突变表型的G0斑马鱼,具有应用潜力。LHX9基因敲除导致原始生殖细胞的发育和迁移受到影响,提示该基因参与了斑马鱼早期性腺的发育。
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| 关 键 词： | CRISPR/Cas9 LHX9 斑马鱼 基因编辑 |
| 收稿时间： | 2019/4/21 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2019/5/18 0:00:00 |
Using A newly Rapid CRISPR/Cas9 System to Perform Genome Editing of Zebrafish LHX9 Gene and Preliminary Screening Gonad Development in F0 Mutant |
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| WANG Nan,ZHU Hui,ZHU Wen-jiao,ZHANG Chang-run,SHEN Ye-lei,DONG Mei,SONG Huai-dong,QIAO Jie.Using A newly Rapid CRISPR/Cas9 System to Perform Genome Editing of Zebrafish LHX9 Gene and Preliminary Screening Gonad Development in F0 Mutant[J].Progress in Modern Biomedicine,2020(1):14-18. |
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| Authors: | WANG Nan ZHU Hui ZHU Wen-jiao ZHANG Chang-run SHEN Ye-lei DONG Mei SONG Huai-dong QIAO Jie |
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| Institution: | Department of Endocrinology, Shanghai Ninth People''s Hospital, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai, 200011, China;Central Laboratory, Shanghai Ninth People''s Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai, 200011, China;Shanghai Nanyang Model High School, Shanghai, 200030, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CRISPR/Cas9 LHX9 Zebrafish Gene edit |
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