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| 抗CPV-2a单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立 | |
| 引用本文： | 王净,李刚,王鹏,曾妮,穆秀明,高志花,王慧文,史利军.抗CPV-2a单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J].基因组学与应用生物学,2011,30(3). |
| 作者姓名： | 王净 李刚 王鹏 曾妮 穆秀明 高志花 王慧文 史利军 |
| 作者单位： | 1. 河北北方学院动物科技学院,张家口,075131;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京,100193 2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京,100193 3. 河北北方学院农林科技学院,张家口,075131 4. 河北北方学院动物科技学院,张家口,075131 |
| 基金项目： | 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金 |
| 摘 要： | 犬细小病毒病是危害养犬业的重要传染病之一,患病犬难以治愈.单克隆抗体治疗此病效果明显,本文介绍了制备抗CPV-2a单克隆抗体的方法.用纯化的犬细小病毒(canine parvovirus,CPV) 2a型分离株免疫新西兰大白兔和Balb/c小鼠制备抗CPV-2a多克隆抗体及单克隆抗体.经亚克隆得到1H9、2B5、2B7和2C7共4株单抗,Western blotting鉴定单抗的免疫反应性;间接ELISA方法检测单抗的特异性.为了快速对犬细小病毒病作出诊断,建立了CPV-2a双抗夹心ELISA方法.兔多抗作为捕获抗体,鼠单抗作为示踪抗体,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG作为检测系统;捕获抗体和示踪抗体最佳稀释度分别为1:800和1:2 000;检测系统最佳稀释度为1:4 000.结果表明:所得4株单抗与pET-32a-VP2蛋白发生特异性反应,且与狂犬病毒(RV)、犬温热病毒(CDV)不交叉反应;建立的双抗夹心ELISA方法对病毒的最低检出量为4.375 μg/mL,与美国RB试剂盒相比,符合率为95%.单抗制备为犬细小病毒病的治疗奠定了基础;双抗夹心ELISA方法的建立为疑似粪便样本提供了简单、快速和可靠的检测手段. |
| 关 键 词： | 犬细小病毒 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA |
Preparation of Monoclonal Antibody Against CPV-2a and Establishment of Double Antibody Sandwich ELISA Detection Method to CPV-2a |
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| Wang Jing,Li Gang,Wang Peng,Zeng Ni,Mu Xiuming,Gao Zhihua,Wang Huiwen,Shi Lijun.Preparation of Monoclonal Antibody Against CPV-2a and Establishment of Double Antibody Sandwich ELISA Detection Method to CPV-2a[J].Genomics and Applied Biology,2011,30(3). | |
| Authors: | Wang Jing Li Gang Wang Peng Zeng Ni Mu Xiuming Gao Zhihua Wang Huiwen Shi Lijun |
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