| 北京棒杆菌转酮酶:基因克隆、序列分析与表达 |
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| 引用本文： | 季维克,赵智,张英姿,王宇,丁久元.北京棒杆菌转酮酶:基因克隆、序列分析与表达[J].微生物学报,2010,50(11):1474-1480. |
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| 作者姓名： | 季维克 赵智 张英姿 王宇 丁久元 |
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| 作者单位： | 1. 中国科学院微生物研究所,北京,100101;中国科学院研究生院,北京100049
2. 中国科学院微生物研究所,北京,100101 |
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| 摘 要： | 【目的】转酮酶是非氧化磷酸戊糖途径中的关键酶。从北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense PD-67)中克隆转酮酶(transketolase,EC2.2.1.1,TK)基因,并将转酮酶基因在C.pekinense PD-67中进行表达,研究增加转酮酶活性对C.pekinense PD-67生理特性的影响。【方法】分别以C.pekinense野生株AS1.299和突变株PD-67的基因组为模板,用PCR方法扩增tkt的全基因序列和前端控制序列;通过pAK6载体提高tkt基因在C.pekinense PD-67中的拷贝数,从而提高C.pekinense PD-67中转酮酶的活性。【结果】tkt基因核苷酸序列及其编码的氨基酸序列与结构分析结果表明,C.pekinense突变株PD-67与野生株AS1.299相比较,二者调控序列及结构基因核苷酸序列完全一致。与谷氨酸棒杆菌ATCC13032相比较,突变株PD-67的氨基酸序列有5个氨基酸差异,其中4个位于与辅因子硫胺素焦磷酸结合的结构域内。突变株PD-67来源的tkt基因在北京棒杆菌PD-67中得到了表达,重组菌转酮酶比活力比对照菌株提高了2倍。C.pekinense PD-67(pTK3)与对照菌株PD-67(pAK6)相比,生长加快,L-色氨酸的最终积累量也较高。【结论】本工作从C.pekinense1.299和PD-67中克隆到tkt基因,并实现tkt基因的同源表达。适当提高菌株转酮酶活力,有助于菌体生长和色氨酸积累。
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| 关 键 词： | 关键词：北京棒杆菌 转酮酶 非氧化磷酸戊糖途径 L-色氨酸 |
| 收稿时间： | 2010/5/10 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2010/6/11 0:00:00 |
Corynebacterium pekinense transketolase: gene cloning, sequence analysis and expression |
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| Weike Ji,Zhi Zhao,Yu Wang,Yingzi Zhang and Jiuyuan Ding.Corynebacterium pekinense transketolase: gene cloning, sequence analysis and expression[J].Acta Microbiologica Sinica,2010,50(11):1474-1480. |
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| Authors: | Weike Ji Zhi Zhao Yu Wang Yingzi Zhang and Jiuyuan Ding |
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| Institution: | Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China;Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China;Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China;Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China;Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Keywords: Corynebacterium pekinense transketolase non-oxidative phosphate pentose pathway L-tryptophan |
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