葡萄球菌肠毒素B定点突变体的构建 |
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作者姓名: | 俞红 钱利生 李雪萍 |
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作者单位: | 上海医科大学微生物教研室!200032 |
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摘 要: | 用PCR技术,从分泌葡萄球菌肠毒素B(SEB)标准株动中扩增正常SEB基因。用PCR致变技术,改变引物中某一特定核仔酸,使与SEB起抗原毒性密切相关的23位关键氨基酸一天冬酸胺(N)定点突变为丝氨酸。将正常SBB和突变SEB基因分别与原核表达质粒PT89.ra重组,转化大肠杆菌JM109,提取转化菌质粒,经酶切鉴定,筛选出重组质拉转化菌。提取纯化重组反粒,经DNA测序证实23位天冬阶胺已由公氨酸替代,而其他氨基酸并未改变,表达】E常SEB和突变SEB蛋白的重组细菌裂解波经Sffi—PAG电泳,在28IClll处可见有表达条带,而未重组菌则…
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