| 核定位信号肽提高核糖体区打靶载体转染效率的研究 |
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| 引用本文： | 石岩,刘雄昊,梁德生,冯劢,邬玲仟,杨俊林,李卓,赵凯,潘乾,龙志高,夏家辉. 核定位信号肽提高核糖体区打靶载体转染效率的研究[J]. 生物化学与生物物理进展, 2009, 36(10): 1283-1290. DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.00174 |
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| 作者姓名： | 石岩 刘雄昊 梁德生 冯劢 邬玲仟 杨俊林 李卓 赵凯 潘乾 龙志高 夏家辉 |
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| 作者单位： | 中南人学医学遗传学国家重点实验室,长沙,410078 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973)(2004CB518800), 国家高技术研究发展计划(863)(2007AA021206, 2007AA021002)和国家自然科学基金(30700458)资助项目 |
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| 摘 要： | 核糖体区打靶载体(10～14 kb)是中南大学医学遗传学国家重点实验室构建的一种具有定点整合能力的非病毒载体,具有安全性好及长期稳定表达的特点,但是较低的转染率成为其应用于临床的主要障碍．核定位信号肽可以促进非病毒载体进入细胞核,从而提高其转染效率．但是核定位信号肽提高外源基因表达的能力却严重受到其与DNA偶联方式及偶联剂的影响．采用偶联剂SPB可以通过静电作用将核糖体区打靶载体与SV40 核定位信号肽有效结合,并且可以防止其被DNase降解．应用聚乙烯亚胺转染人原代皮肤成纤维细胞后,激光共聚焦显微镜观察显示,核定位信号肽可以在60 min内携带12 kb的质粒DNA进入细胞核．转染后48 h,流式细胞仪检测GFP表达,结果显示转染率提高了4～5倍．聚乙烯亚胺是一种毒性小,而且价格低廉的高分子转染试剂,广泛被应用于体内基因治疗的研究中,上述研究将会促进核糖体区打靶载体在临床基因治疗中的应用．
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| 关 键 词： | 核定位信号肽 核糖体区打靶载体 转染效率 原代皮肤成纤维细胞 基因治疗 聚乙烯亚胺 |
| 收稿时间： | 2009-03-23 |
| 修稿时间： | 2009-07-12 |
The Transfection Efficiency Improvement of hrDNA Targeting Vectors With NLS Peptide |
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| SHI Yan,LIU Xiong-Hao,LIANG De-Sheng,FENG Mai,WU Ling-Qian,YANG Jun-Lin,LI Zhuo,ZHAO Kai,PAN Qian,LONG Zhi-Gao and XIA Jia-Hui. The Transfection Efficiency Improvement of hrDNA Targeting Vectors With NLS Peptide[J]. Progress In Biochemistry and Biophysics, 2009, 36(10): 1283-1290. DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.00174 |
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| Authors: | SHI Yan LIU Xiong-Hao LIANG De-Sheng FENG Mai WU Ling-Qian YANG Jun-Lin LI Zhuo ZHAO Kai PAN Qian LONG Zhi-Gao XIA Jia-Hui |
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| Affiliation: | State Key Laboratory of Medical Genetics, Central South University, Changsha 410078, China;State Key Laboratory of Medical Genetics, Central South University, Changsha 410078, China;State Key Laboratory of Medical Genetics, Central South University, Changsha 410078, China;State Key Laboratory of Medical Genetics, Central South University, Changsha 410078, China;State Key Laboratory of Medical Genetics, Central South University, Changsha 410078, China;State Key Laboratory of Medical Genetics, Central South University, Changsha 410078, China;State Key Laboratory of Medical Genetics, Central South University, Changsha 410078, China;State Key Laboratory of Medical Genetics, Central South University, Changsha 410078, China;State Key Laboratory of Medical Genetics, Central South University, Changsha 410078, China;State Key Laboratory of Medical Genetics, Central South University, Changsha 410078, China;State Key Laboratory of Medical Genetics, Central South University, Changsha 410078, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | nuclear localization signal peptide human rDNA vectors transfection efficiency human dermal fibroblasts gene therapy polyethylenimine |
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