| 摘 要： | 为探讨p53上调凋亡调制物(p53 up-regulated modulator of apoptosis, PUMA)在大鼠心肌细胞缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenatio, H/R）损伤中的作用,本 研究将靶向PUMA的siRNA（si-PUMA）转染大鼠心肌细胞以建立PUMA沉默表达模型,观察其对心肌细胞H/R损伤的影响.RT-PCR和Western印迹结果表明,最适转染浓度50 nmol/L si-PUMA能靶向抑制H/R损伤心肌细胞的PUMA表达;MTT法检测心肌细胞存活率及培养基乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）活性测定结果发现,si-PUMA 组细胞存活率较H/R 6 h模型组明显提高,培养液中LDH活性显著降低（P<0.01）;分光光度法及Annexin V-FITC/PI联合染色流式细胞凋亡检测结果显示,si-PUMA组caspase-3活性较H/R 6h组明显下调,细胞凋亡率明显降低（P <0.01）;RT-PCR结果 提示,与H/R 6 h组相比,si-PUMA组Bax及Bcl-2表达分别出现显著下调及上调（P <0.05）.以上结果表明,靶向PUMA的siRNA转染能明显增强心肌细胞耐受H/R损伤的能力,对心肌细胞具有较好的保护作用;PUMA介导H/R诱导的心肌细胞凋亡,是心肌缺血/再灌注损伤基因治疗的一个潜在靶点.
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