利用Gal4/ VP16- UAS 和双荧光素酶报告基因
系统检测??- 分泌酶活性 |
| |
引用本文: | 刘忠华??,阮??,燕??,查芹芹??,张??,岱.利用Gal4/ VP16- UAS 和双荧光素酶报告基因
系统检测??- 分泌酶活性[J].现代生物医学进展,2006,6(3):1-4. |
| |
作者姓名: | 刘忠华?? 阮?? 燕?? 查芹芹?? 张?? 岱 |
| |
作者单位: | 北京大学精神卫生研究所,北京,100083 |
| |
摘 要: | 目的:确立基于Gal4/vp16-UAS和双荧光素酶报告基因系统检测γ-分泌酶切割淀粉样前体蛋白活性的方法。方法:将插入上游激活序列(SAS)和萤火虫荧光素酶报告基因的质粒MH100,嵌舍酵母活性转录因子(Gal4)、单纯疱疹病毒蛋白(VP16)和γ-分泌酶切割位点的质粒C99-GVP,以度海肾荧光素酶质粒pRL—CMV,用脂质体转染法转入稳定表达淀粉样前体蛋白C末端的人神经母细胞瘤细胞(SH—SYSY),用免疫沉淀Western blot分析法检测β-淀粉样蛋白(邶)的生成,利用Gal4/vp16-UAS和双荧光素酶报告基因系统测定荧光素酶报告基因的表达。结果:免疫沉淀Westem blot分析表明A(的生成在γ-分泌酶激活荆神经节苷脂GM1作用下升高并呈剂量依赖性,同时双荧光素酶法检测γ-分泌酶活性也同步升高。在γ-分泌酶抑制荆作用下Aβ的产生呈荆量依赖性的减少,同时γ-分泌酶活性也同步降低。结论:基于Gal4/vp16-UAS和双荧光素酶报告基因系统检测γ-分泌酶活性的方法有效可靠,是一种敏感、定量的检测方法。
|
关 键 词: | 双荧光素酶 γ-分泌酶 阿尔茨海默症 |
收稿时间: | 2006-03-26 |
修稿时间: | 2006-04-10 |
本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录! |
| 点击此处可从《现代生物医学进展》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《现代生物医学进展》下载免费的PDF全文 |
|