长梗木霉内切葡聚糖酶Ⅰ基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达 |
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作者姓名: | 刘海英 王娟 舒正玉 吴松刚 黄建忠 |
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作者单位: | 福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院,福建,福州,350108 |
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基金项目: | 福建省发改委重大项目,福建省科技厅重大项目 |
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摘 要: | 一株纤维素酶高产菌株经ITS序列鉴定并命名为长梗木霉SSL(Trichoderma longi-brachiatum,SSL).利用RT-PCR的方法从该菌株中克隆出内切-1-4-β-D-葡聚糖酶Ⅰ的基因(eg1),该基因全长1386 bp,编码461个氨基酸.序列分析表明:该基因序列与T. longibrachiatum egl1基因具有90%以上的同源性.将该基因的成熟肽编码序列插入到Pichiapastoris表达载体pPIC9k中,构建重组表达质粒pPIC9k-eg1,转化P.pastoris GS115.重组P.pastoris菌株,经甲醇诱导后,胞外重组内切葡聚糖酶Ⅰ的活力达73 U/mL.SDS-PAGE中出现一条明显加强的蛋白质条带,其分子量大约为58 kD.
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关 键 词: | 分子标记 内切葡聚糖酶Ⅰ 毕赤酵母 表达 |
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