| 玉米赤霉烯酮降解酶多拷贝毕赤酵母菌株的构建及高效表达 |
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| 作者姓名： | 王义春 王龑 江均平 赵月菊 邢福国 周露 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院农产品加工研究所 农业部农产品加工综合性重点实验室,北京 100193,中国农业科学院农产品加工研究所 农业部农产品加工综合性重点实验室,北京 100193,中国农业科学院农产品加工研究所 农业部农产品加工综合性重点实验室,北京 100193,中国农业科学院农产品加工研究所 农业部农产品加工综合性重点实验室,北京 100193,中国农业科学院农产品加工研究所 农业部农产品加工综合性重点实验室,北京 100193,中国农业科学院农产品加工研究所 农业部农产品加工综合性重点实验室,北京 100193 |
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| 基金项目： | 中国农业科学院农产品加工研究所基本科研业务费 (No. S2017JC02),北京市自然科学基金 (No. 5083025),北京市粮经作物产业创新团队基金 (No. BAIC09-2018) 资助。 |
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| 摘 要： | 通过密码子优化、体外多拷贝构建实现玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)降解酶基因(zlhy-6)在毕赤酵母GS115菌株中的高效表达。按酵母密码子偏好性优化zlhy-6基因的密码子,与α因子信号肽编码序列一起合成,插入到pAO815质粒中,通过酶切酶连构建含1–6个表达盒的表达质粒,将其转入毕赤酵母GS115菌中,获得ZEN降解酶重组菌株。重组蛋白分子量为28.9 kDa,与预期一致。重组菌用甲醇诱导3 d,蛋白浓度达最高,之后下降;在pH 5.0、4.5条件下诱导培养,表达量最高;每天添加0.8%的甲醇、接种量10%表达水平最高;4拷贝的转化子表达水平最高,三角瓶发酵3 d,酶活性达到10 U/mL。在1 g玉米渣中添加0.1–0.5 mL发酵上清液,水解24 h,玉米渣中ZEN的降解率为44.08%–75.51%。研究结果为ZEN降解酶工业生产及在食品饲料中的应用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 玉米赤霉烯酮 降解 zlhy-6 高效表达 多拷贝 毕赤酵母 |
| 收稿时间： | 2019-04-20 |
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