| Canstatin-N基因在Pichia pastoris中表达及产物活性分析 |
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| 引用本文： | 潘英文,张爱联,屈直,张添元,罗进贤.Canstatin-N基因在Pichia pastoris中表达及产物活性分析[J].生物技术,2010,20(3):25-28. |
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| 作者姓名： | 潘英文 张爱联 屈直 张添元 罗进贤 |
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| 作者单位： | 1. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所,农业部热带作物生物技术重点开放实验室,海南,海口,571101
2. 中山大学生命科学学院,广东,广州,510275 |
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| 基金项目： | 海南省重点科技计划项目，国家自然科学基金，中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目 |
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| 摘 要： | 目的：应用P.pastoris的pAOX1表达系统胞内表达canstatin-N蛋白。方法：通过PCR DNA合成技术以及DNA的酶切和连接技术,除去pPIC9K分泌型表达载体的信号肽,并使其载体的多克隆位点的3′端融合his6纯化标签,获得新的载体pPIC9Ki。以含canstatin N端序列的pET-CTN质粒为模版,PCR法扩增1～89个氨基酸的267bp的canstatin的N端基因片段,将其连接于pPIC9Ki的多克隆位点,获得重组表达质粒pPIC9Ki-CTN-N,用电转法将pPIC9Ki-CTN-N转化P.pastorisGS115,通过G418抗性筛选获得工程菌GS115（pPIC9Ki-CTN-N）。通过摇瓶发酵甲醇诱导表达Canstatin-N蛋白。用蜗牛酶裂解P.pastoris细胞,SDS-PAGE分析蛋白表达情况,在鸡胚中进行活性分析。结果：在pAOX1的调控下,canstatin-N基因能在P.pastoris中经甲醇诱导表达,摇瓶发酵表达量为65mg/L,纯化的目的蛋白具有显著的抑制鸡胚尿囊膜血管生成的作用。结论：实现应用P.pastoris表达Canstatin-N蛋白,为Canstatin-N蛋白的规模化生产和进一步的药用研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | canstatin-N P.pastoris 基因表达 |
Expresstion of Canstatin-N in P.pastoris and Its Biology Activity Analysis |
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| PAN Ying-wen,ZHANG Ai-lian,QV Zhi,ZHANG Tian-yuan,LUO Jin-xian.Expresstion of Canstatin-N in P.pastoris and Its Biology Activity Analysis[J].Biotechnology,2010,20(3):25-28. |
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| Authors: | PAN Ying-wen ZHANG Ai-lian QV Zhi ZHANG Tian-yuan LUO Jin-xian |
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| Keywords: | canstatin-N P pastoris |
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