用杆状病毒-昆虫细胞系统表达、纯化重组的人源化氨基末端LBP |
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作者姓名: | 王长松 刘友生 葛晓冬 李红 陈燕平 |
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作者单位: | 1. 第三军医大学西南医院病理学研究所, 重庆 400038;
2. 第三军医大学研究生管理大队三队, 重庆 400038 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目 (3 0 2 713 42 ) |
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摘 要: | 根据已有的资料显示LBP与LPS的结合位点位于其氨基末端的第 91~ 1 0 0个氨基酸残基。在体外构建含有人LBP与LPS结合活性部分的穿梭质粒pBacmidtLBP ,并且带上 6×his的标签 ,用此穿梭质粒转染sf2 1昆虫细胞 ,获得重组病毒。然后用重组病毒液感染对数生长期的sf2 1昆虫细胞 ,72h后收获含有这种截断型人源化氨基末端LBP-(NH-LBP)的培养上清。用金属亲和树脂纯化后 ,采用SDS-PAGE电泳以及Western-Blot鉴定所得到的纯化物。成功获得相对分子质量约为 30 0 0 0的NH-LBP。为进一步研究LBP在介导LPS活化靶细胞中的作用机制奠定了基础。
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关 键 词: | NH-LBP 杆状病毒表达系统 金属亲和层析 鉴定 |
收稿时间: | 2004-06-21 |
修稿时间: | 2004-06-21 |
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