| 人白细胞介素－3在大肠杆菌中的高效表达 |
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| 引用本文： | 杨立宏,陈常庆,周斌,陈南春,药立波,苏成芝.人白细胞介素－3在大肠杆菌中的高效表达[J].生物化学与生物物理学报,1994(5). |
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| 作者姓名： | 杨立宏 陈常庆 周斌 陈南春 药立波 苏成芝 |
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| 作者单位： | 中国科学院上海生物工程研究中心，第四军医大学生物化学教研室 |
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| 摘 要： | 人白细胞介素－３（ｈｕｍａｎＩｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ３，ｈＩＬ－３）是一种造血前体细胞早期分化的关键调节因子。用ＰＣＲ方法从人Ｔ淋巴细胞ｃＤＮＡ文库中扩增出０．４４ｋｂ的ＤＮＡ片段，并克隆入ｐＵＣ１９载体中。经ＤＮＡ序列测定，确定０．４４ｋｂ的ＰＣＲ产物合完整的编码人白细胞介素－３成熟蛋白ｃＤＮＡ序列，并在信号肽与成熟蛋白编码序列之间通过突变引入了限制性内切酶位点和ＡＴＧ起始密码。构建的ＰＬ启动子控制下的ｈＩＬ－３ｃＤＮＡ表达质粒，转入大肠杆菌Ｔａｐ１０６，经４２℃热诱导，获得ｈＩＬ－３的表达产物。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示表达产物为１５ｋｄ，约占细菌总蛋白的１５％。表达产物经ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ验证。ｈＩＬ－３表达产物在细胞内形成包涵体，纯化包涵体，使产物纯度提高到７０．８％，产物复性后，能明显促进ｈＩＬ－３依赖细胞株生长，具有明显的生物活性。产物转移到ＰＶＤＦ膜后进行Ｎ端序列分析，Ｎ端１６个氨基酸正确。
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| 关 键 词： | 人白细胞介素－3基因 大肠杆菌中表达 聚合酶链反应 |
High-Level Expression of the Gene Encoding Human Interleukin-3 in E.coli |
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| YANG Li-Hong, CHEN Chang-Qing, ZHOU Bing,CHEN Nan-Chun,YAO Li-Bo and SU Cheng-Zhio.High-Level Expression of the Gene Encoding Human Interleukin-3 in E.coli[J].Acta Biochimica et Biophysica Sinica,1994(5). |
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| Authors: | YANG Li-Hong CHEN Chang-Qing ZHOU Bing CHEN Nan-Chun YAO Li-Bo and SU Cheng-Zhio |
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| Institution: | YANG Li-Hong, CHEN Chang-Qing, ZHOU Bing,CHEN Nan-Chun,YAO Li-Bo and SU Cheng-Zhio 1 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Interlenkin 3 gene Expression in E coli PCR |
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