广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用受体TLR4和TLR2的影响 |
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引用本文: | 王萌皓,郝正祺,常明昌,孟俊龙,刘靖宇,冯翠萍.广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用受体TLR4和TLR2的影响[J].菌物学报,2020,39(5):907-916. |
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作者姓名: | 王萌皓 郝正祺 常明昌 孟俊龙 刘靖宇 冯翠萍 |
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作者单位: | 1. 山西农业大学食品科学与工程学院 山西 太谷 0308012. 山西省食用菌工程技术研究中心 山西 太谷 030801 |
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基金项目: | 山西省重点研发计划重点项目;山西省研究生教育创新项目;山西省科技创新重点团队项目;山西农谷建设科研专项 |
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摘 要: | 确定广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用受体,探索广叶绣球菌β-D-葡聚糖的免疫调节机制。采用MTT法测定不同浓度广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7增殖活力的影响,筛选出促进巨噬细胞增殖能力最强的浓度。用筛选出的β-D-葡聚糖浓度作用巨噬细胞RAW264.7;TLR4抗体和TLR2抗体分别作用巨噬细胞RAW264.7 1h,再用含有β-D-葡聚糖的细胞培养液培养。收集细胞培养上清和细胞,检测细胞培养上清中NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量;提取细胞内总RNA,采用RT-PCR测定巨噬细胞TLR4 mRNA表达量;提取巨噬细胞总蛋白,采用蛋白免疫印迹western blot测定TLR4的蛋白表达。广叶绣球菌β-D-葡聚糖能够促进巨噬细胞RAW264.7增殖,增加NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量,提高TLR4 mRNA表达和蛋白表达,差异极显著(P<0.01)。TLR4抗体作用细胞后,NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量明显下降,差异极显著(P<0.01)。TLR2抗体作用细胞后,NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量下降,但差异不显著。广叶绣球菌β-D-葡聚糖可以通过细胞表面受体TLR4激活信号转导通路,增强下游细胞因子的释放,从而调节巨噬细胞RAW264.7的免疫功能。TLR2可能不是广叶绣球菌β-D-葡聚糖的免疫受体。
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关 键 词: | 广叶绣球菌β-D-葡聚糖 巨噬细胞RAW264.7 免疫受体 TLR4抗体 TLR2抗体 |
收稿时间: | 2020-03-27 |
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