CD36原核表达载体的构建及生物信息学分析

目的]对CD36基因进行体外克隆表达,建立CD36基因eDNA在大肠杆菌中表达的实验技术以及进行CD36蛋白三级结构的预测并利用生物信息学方法进行分析。方法]以人血液RNA为模板,RT-PCR扩增CD36的基因序列;并构建原核表达质粒pET-32a-CD36转化到大肠杆菌DE3中后,经过IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE验证。结果]成功克隆了人CD36基因并构建出原核表达质粒,成功转人表达菌大肠杆菌DE3中后经IPTC诱导成功表达,且在1mmo/L的诱导剂浓度下培养6h表达量最佳。利用Phyre2和Abepred软件预测蛋白质结构和B细胞抗原表位,B细胞抗原表位评分大于0.85的CD36的B细胞抗原表位有8个。结论]成功建立了人CD36基因的原核表达的实验技术,并对CD36的结构及B细胞抗原表位进行了预测,为后续研究CD36基因的功能和抗体制备提供方向和奠定基础。