在真核细胞转化中控制DNA沉淀速度的简易方法

目前,在基因工程操作技术中,磷酸钙沉淀技术的应用越来越广泛。利用这一技术已成功地使各种外源基因重组质粒转化真核细胞并获得了表达。但是,这一方法的条件要求比较严格,尤其是钙沉淀的速度以及转化时机不易掌握。根据文献报告,DNA沉淀的形成与其纯度、盐离子浓度和转化液的pH等因素密切相关,尤其是转化液的pH值须严格限定在7.1±0.05之间。我们在实验中发现,应用按要求配制的pH7.1±0.05的转化液时,加入DNA后沉淀出现的时间有长有短,颗粒也有大有小,使转化不容易成功。为此,我们用一种简单的方法来纠正其pH值,控制钙沉淀速度。