| 丙型肝炎病毒E2糖蛋白糖基化作用的研究 |
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| 引用本文： | 万崎,章晓联,陈新文.丙型肝炎病毒E2糖蛋白糖基化作用的研究[J].生物技术通讯,2003,14(5):447-449. |
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| 作者姓名： | 万崎 章晓联 陈新文 |
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| 作者单位： | 武汉大学,基础医学院免疫学系,武汉,430071 |
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| 基金项目： | 中国科学院武汉病毒研究所与荷兰农业大学病毒系开放课题基金，湖北省重点科技攻关项目(2002AA301B15)，湖北省人事厅留学人员科技活动择优资助项目(301140200) |
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| 摘 要： | 本研究构建丙型肝炎病毒(HCV)糖蛋白E2的N-糖基化位点定点突变体。采用高保真性的Pfx DNA聚合酶，设计两对引物，分别引入两个突变位点，通过PCR体外定点突变，使E2第535、583位核苷酸由A突变为T，从而使AAC编码的天冬酰氨突变为TAC编码的酪氨酸，使得N-糖苷化位点NNT、NST突变为YNT、YST.结果得到两个单位点以及一个双位点突变体，并将突变型E2连接到真核表达载体peDNA3．1(-)／Myc—HisB上。成功获得的3个HCVE2糖蛋白糖基化位点定点突变体，为进一步进行HCVE2糖蛋白糖基化位点与分子伴侣之间的相互关系以及突变体对机体的免疫功能的影响的研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 丙型肝炎病毒 N-糖基化位点 突变体 E2糖蛋白 |
| 文章编号： | 1009-0002(2003)05-0447-03 |
| 修稿时间： | 2003年7月27日 |
Construction of the three N-glycosylation site-specific mutants of HCV E2 glycoprotein |
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| WAN Qi,ZHANG Xiao-lian,CHEN Xin-wen.Construction of the three N-glycosylation site-specific mutants of HCV E2 glycoprotein[J].Letters in Biotechnology,2003,14(5):447-449. |
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| Authors: | WAN Qi ZHANG Xiao-lian CHEN Xin-wen |
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| Abstract: | To construct three N-glycosylation site-specific mutants of HCV E2.Pfx DNA polymerase were used and four synthetic oligonucleotide primers were designed.By the use of PCR method,two single and one double N-gly-cosylation mutation were obtained.In these N-glycosylation sites,Asn-X-Thr /Ser,Asn encoding codon were replaced by-Tyr-encoding codon.Two single site(A535T and A583T)mutants and one double sites(A535T,A583T)mutant were obtained,and they were ligated in-frame into the vector pcDNA3.1(-)/Myc-HisB. |
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| Keywords: | HCV E2 N-glycosylation sites mutant |
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