| 玉米根V-ATPase的A亚基磷酸化位点的鉴定 |
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| 作者姓名： | 刘贯山 陈硕 陈珈 王学臣 |
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| 作者单位： | 刘贯山 (中国农业大学生物学院,植物生理学与生物化学国家重点实验室,北京,100094) ; 陈硕 (中国农业大学生物学院,植物生理学与生物化学国家重点实验室,北京,100094) ; 陈珈 (中国农业大学生物学院,植物生理学与生物化学国家重点实验室,北京,100094) ; 王学臣 (中国农业大学生物学院,植物生理学与生物化学国家重点实验室,北京,100094) ; |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划),国家自然科学基金,高等学校博士学科点专项科研项目 |
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| 摘 要： | 以玉米(Zea mays L)根的高纯度液泡膜为材料进行的磷酸化反应表明,液泡膜蛋白的磷酸化可明显提高v型H -ATPase(V-ATPase)的ATP水解活性和H 转运活性.进一步研究表明,纯化的液泡膜蛋白能被硫代磷酸化,用V-ATPase的A亚基抗体将一条约69 kD的条带鉴定为A亚基.为了测定V-ATPase的A亚基的磷酸化位点,从硫代磷酸化的凝胶中切下A亚基条带并用胰蛋白酶彻底消化.用RP-HPLC分离纯化酶解片断,收集纯化的硫代磷酸化肽段进行质谱分析所测定的分子量为573.83 Da.A亚基胰蛋白酶彻底消化后能产生61个肽段,只有F56肽段的分子量573.66 Da与573.83 Da最接近,而且F56肽段上只有第525位的丝氨酸可以被磷酸化.因此可以确定,玉米根V-AT-Pase A亚基的潜在磷酸化位点为Ser525.就我们所知,这是首次确定植物V-ATPase A亚基的磷酸化位点.
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| 关 键 词： | A亚基 磷酸化位点 液泡膜 玉米 |
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