| 重组α-环糊精葡萄糖基转移酶表达条件的优化及其产物专一性的分析 |
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| 引用本文： | 宋炳红,薛智权,钟健,朱启忠,钞亚鹏,钱世钧.重组α-环糊精葡萄糖基转移酶表达条件的优化及其产物专一性的分析[J].生物加工过程,2012,10(1):30-36. |
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| 作者姓名： | 宋炳红 薛智权 钟健 朱启忠 钞亚鹏 钱世钧 |
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| 作者单位： | 1. 山东大学威海分校海洋学院,威海,264209
2. 中国科学院微生物研究所,北京,100101 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 将来源于Bacillus sp 602 -1的α-环糊精葡萄糖基转移酶(ot-CGT)基因(cgt)插入到表达载体PQE30中,构建重组质粒PQE30/cgt,成功转化宿主菌E coli M15后,得到重组菌株E coli M15 (PQE30/cgt).在IPTG的诱导下得到酶表达的最适条件:TB培养基,0.01 mmol/L IPTG,诱导温度16℃,胞内酶比活力最高可达5 209 U/mL;加入IPTG 24 h后,添加甘氨酸和甘露醇会促使酶向胞外分泌.酶蛋白自诱导表达的适宜条件为在TB培养基中添加乳糖3.0 g/L,葡萄糖1.2 g/L,16℃培养96 h,酶比活力达到8 635 U/mL,明显高于IPTG诱导的效果.通过SDSPAGE验证了上述结论.酶催化转化实验表明:重组酶转化质量分数为1％可溶淀粉24h后,α-环糊精(α-CD)转化率可达38.2％,α和β的峰面积比约为3.4:1,α-CD具有较高的专一性,因此该重组α-CGT酶具有较好的工业化应用前景.
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| 关 键 词： | α-环糊精葡萄糖基转移酶 PQE30 表达及优化 |
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