猴免疫缺陷病毒（SIV）实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立快速、敏感、特异的猴免疫缺陷病毒（SIV）TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法，对SIV病毒核酸进行定量检测。方法RT—PCR扩增SIVmac251保守gag基因序列796bp片段，进行TA克隆，构建标准品质粒pMD—SIVgag。通过对SIV定量外标准品的定量分析，优化反应体系，检测TaqMan探针实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性和重复性。结果所建立的SIVQPCR检测方法，质粒DNA模板在10’～10。拷贝之间表现较好线性和相关性，标准曲线所得斜率为-3．26，相关系数为0．999。检测灵敏度达到200拷贝，方法重复性测试，检测25份临床样品CV％均小于1％。结论建立的SIVQPCR检测方法特异性、敏感性高，稳定性好，可用于定量测定猴免疫缺陷病毒（SIV）核酸拷贝量。