| 高粱花叶病毒外壳蛋白的原核表达及其抗血清制备 |
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| 引用本文： | 王洪星,龚殿,孙玉娟,张雨良,王健华,刘志昕. 高粱花叶病毒外壳蛋白的原核表达及其抗血清制备[J]. 生物技术通报, 2013, 0(1): 166-171 |
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| 作者姓名： | 王洪星 龚殿 孙玉娟 张雨良 王健华 刘志昕 |
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| 作者单位： | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室 |
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| 基金项目： | 中央级公益性科研院所基本科研业务专项(ITBB110303);现代农业产业技术体系建设专项资金(nycytx-24) |
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| 摘 要： | 高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)是世界上分布最广的侵染甘蔗的病毒之一,引起甘蔗花叶病,对甘蔗产业危害很大。根据SrMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因序列合成一对引物,以海南(SrMV-HN)染病植株总RNA为材料,采用RT-PCR方法克隆了长约987 bp的目的片段。将CP基因与质粒pET32a(+)连接,构建了含SrMV CP基因的融合蛋白原核表达载体pET32a-SrMVCP。然后用正确的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测出一条约36kD的特异融合蛋白表达谱带。融合蛋白主要以可溶性蛋白形式稳定表达。通过优化诱导条件,确立了CP基因表达的最佳条件:IPTG终浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为4 h,诱导温度为30℃。用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白,免疫家兔制备出抗血清。通过酶联法(ID-ELISA)测定本试验制备的SrMV CP抗血清工作浓度为1∶1 000,Western blotting检测结果表明,抗血清与SrMV-HN诱导表达的CP蛋白发生特异性反应。对田间25个甘蔗样品进行检测,结果表明该抗血清的效价高、灵敏度高、特异性强,可以应用于田间样品的检测。
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| 关 键 词： | 高粱花叶病毒 外壳蛋白 原核表达 抗血清 |
Prokaryotic Expression of CP Gene of Sorghum mosaic virus and Preparation of Polyclonal Antibody |
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| Wang Hongxing Gong Dian Sun Yujuan Zhang Yuliang Wang Jianhua Liu Zhixin. Prokaryotic Expression of CP Gene of Sorghum mosaic virus and Preparation of Polyclonal Antibody[J]. Biotechnology Bulletin, 2013, 0(1): 166-171 |
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| Authors: | Wang Hongxing Gong Dian Sun Yujuan Zhang Yuliang Wang Jianhua Liu Zhixin |
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| Affiliation: | Wang Hongxing Gong Dian Sun Yujuan Zhang Yuliang Wang Jianhua Liu Zhixin(Key Laboratory of Biology and Genetic Resources of Tropical Crops,Ministry of Agriculture,P.R.China,Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology,Chinese Academy of Tropical Agricultural Science,Haikou 571101) |
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