| 集成干扰素突变体IIFN/165S的构建及其生物学评价 |
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| 引用本文： | 田硕,姚文兵,徐晨.集成干扰素突变体IIFN/165S的构建及其生物学评价[J].中国生物工程杂志,2013,33(7):8-12. |
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| 作者姓名： | 田硕 姚文兵 徐晨 |
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| 作者单位： | 1. 中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 医学分子生物学国家重点实验室 北京 100005;2. 中国药科大学 210009;3. 北京三元基因工程有限公司 北京 102600 |
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| 基金项目： | 北京市科委基础研究专项课题资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:通过定点突变,构建集成干扰素(IIFN/165S),以期获得高效的新型药物分子.方法:采用PCR体外定点突变技术,使集成干扰素IIFN基因的第165位密码子由CGT突变为AGT.扩增片段克隆入pET-23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3).在LB培养基中培养,经IPTG诱导表达的IIFN/165S经包涵体变性、复性以及层析纯化后,经SDS-PAGE、Western blot和MALDI-TOF-MS分析,用WISH-VSV系统进行抗病毒活性测定同时应用流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:IIFN/165S以包涵体形式表达.纯化后,IIFN/165S的纯度大于95％,分子量为18172,比活性(7.63±0.22)×108 IU/mg,诱导细胞凋亡率呈剂量依赖.结论:构建了IIFN/165S的表达载体,并成功地在大肠杆菌中表达,获得了高纯度高活性突变分子IIFN/165S.
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| 关 键 词： | 集成干扰素 定点突变 高效 抗肿瘤 |
| 收稿时间： | 2012-12-11 |
Construction and Biological Assay of Integrated Interferon Mutant IIFN/165S |
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| TIAN Shuo,YAO Wen-bin,XU Chen.Construction and Biological Assay of Integrated Interferon Mutant IIFN/165S[J].China Biotechnology,2013,33(7):8-12. |
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| Authors: | TIAN Shuo YAO Wen-bin XU Chen |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Integrated interferon Site-directed mutagenesis High potency Anti-tumor |
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