家蝇幼虫抗菌肽Attacin基因的克隆表达及抑菌生物学活性 |
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作者姓名: | 徐建华 朱家勇 金小宝 许琴英 |
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作者单位: | [1]广州中医药大学第二附属医院检验科,广州市510120 [2]广东药学院生命科学与生物技术研究中心,广州市510224 [3]广东医学院病原生物学教研室,广东省湛江市524023 |
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摘 要: | 目的克隆家蝇幼虫Attacin抗菌肽基因.构建原核融合表达载体,建立Attacin体内抗菌活性检测系统,优化表达和纯化Attacin目的蛋白,并初步研究其抗菌生物学功能。方法以pUC m-T/Attacin重组质粒为模板,设计特异性引物,PCR扩增Attacin编码区序列,分别克隆至原核表达载体pET30a(+)和pGEX-4T-1。构建原核重组质粒,转化大肠埃希菌,表达重组Attacin蛋白,并在大肠埃希菌中体内检测Attacin的抗菌活性。利用亲和层析柱纯化重组融合蛋白Attacin,SDS-PAGE进行纯度分析,琼脂糖平板抑菌试验鉴定其生物活性。结果pET30a(a+)/Attacin和pGEX-4T—1/Attacin重组质粒分别转化大肠埃希菌后,以IPTG诱导表达,与未诱导对照相比,含有重组质粒的宿主菌生长受到抑制。从pET30a(+)/Attacin重组质粒的表达宿主菌中未能获得His-Attacin融合蛋白,而从pGEX-4T—1/Attacin重组质粒转化菌种获得GST-Attacin融合蛋白。SDS-PAGE分析表明Attacin重组蛋白分子量与预期结果一致,琼脂糖平板抑菌试验显示重组Attacin具有抗菌活性。结论Attacin基因在原核系统中成功表达,并且纯化后具有抑菌活性,为下一步研究Attacin的生物学功能及其应用开发奠定了基础。
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关 键 词: | 家蝇 抗菌肽Attacin 基因克隆 生物信息学分析 原核表达 |
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