螺旋霉素聚酮合成酶基因和抗性基因的克隆与表达的研究

根据不同聚酮合成酶基因DNA的同源性，利用放线紫红素聚酮合成酶基因act Ⅰ，actⅢ作探针，从螺旋霉索产生菌Str．spiramyceticus U-1941基因文库中检测并分离了螺旋霉素聚酮合成酶基因pCN3H8。限制酶酶切分析表明，其分子量为44kb。通过分子杂交实验，将螺旋霉素聚酮缩合酶基因(与act Ⅰ有同源性)及聚酮氧化还原酶基因(与actⅢ有同源性)进行了定位。pCN3H8 DNA在麦迪霉素产生菌变株Str.mycarofaciens sub sp．68中的表达产物，经紫外光谱分析与麦迪霉素相似。pCN3H8在放线紫红素聚酮缩合酶基因缺陷型变株Str．coelicolor TKl7中的表达产物，不具有放线紫红素的色素，其纸层析谱型与螺旋霉素有显著差别。pCN3H8在变青链霉菌Str．lividans TK24中的表达产物，也具有抗菌活性。将pCN3H8 DNA转化对螺旋霉素敏感的Str.griseofuscus原生质体，获得了螺旋霉素抗性的表达。从转化子中分离得到了质粒DNA pSG3，其分子量为7．0kb，可能是pCN3H8DNA转化Str．grlseofuscus时在体内缺失而形成。再转化实验证明，宿主菌对螺旋霉索的抗性，确实是由于pSG3 DNA作用的结果。含质粒pCG4，pSG3的螺旋霉素产生菌Str．Ambofaciens转化子螺旋霉素的产率明显提高。