| 人胰岛素样生长因子-1真核双顺反子表达载体pIRSES2-EGFP-hIGF-1的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 续宗耀,王英振,张海宁,吕成昱,周峰.人胰岛素样生长因子-1真核双顺反子表达载体pIRSES2-EGFP-hIGF-1的构建与鉴定[J].现代生物医学进展,2013,13(15):2837-2840. |
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| 作者姓名： | 续宗耀 王英振 张海宁 吕成昱 周峰 |
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| 作者单位： | 青岛大学医学院附属医院关节外科 山东青岛266003 |
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| 基金项目： | The National Natural Science Foundation of China，国家自然科学基金项目 |
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| 摘 要： | 目的:利用基因工程原理构建人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)全长基因的真核表达栽体pIRES2-EGFP-hIGF-1,并观察其在人胚肾293细胞中的表达.方法:应用PCR方法从人肝细胞文库中提取人hIGF-1全长cDNA序列,克隆入T-pMD18载体中,经测序证实序列正确后,利用XhoI/EcoRI进行双酶切并定向插入真核表达载体pIRES2-EGFP中,利用双酶切、电泳和PCR进行鉴定证实插入片段的正确性.应用高效转染试剂X-treme GENE HP DNA Transfection reagent介导真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1转染人胚肾细胞(HEK293),转染后利用倒置荧光显微镜与RT-PCR观察目的基因在靶细胞中的表达.结果:经酶切和测序证实重组质粒栽体构建正确,转染后48小时可观察到绿色荧光的表达,RT-PCR结果证实转染pIRES2-EGFP-hIGF-1后可有hIGF-1基因靶细胞中表达.结论:成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1,目的基因与标记基因可同时在靶细胞中表达,为后续研究奠定基础.
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| 关 键 词： | 人胰岛素样生长因子1 基因 载体 转染 |
Construction and Detection of Bicistronic Eukaryotic Vector pIRSES2-EGFP-hIGF-1 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Insulin-like growth factor 1 Gene Vector Transfection |
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