| 金黄色葡萄球菌核酸酶A与不同外源DNA片段融合表达的作用比较 |
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| 引用本文： | 付立霞,冀德君,卢徐斌,韩先干,魏文志.金黄色葡萄球菌核酸酶A与不同外源DNA片段融合表达的作用比较[J].生物工程学报,2016,32(12):1654-1663. |
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| 作者姓名： | 付立霞 冀德君 卢徐斌 韩先干 魏文志 |
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| 作者单位： | 1 扬州大学动物科学与技术学院 江苏省人畜共患病学重点实验室，江苏 扬州 225009,1 扬州大学动物科学与技术学院 江苏省人畜共患病学重点实验室，江苏 扬州 225009,1 扬州大学动物科学与技术学院 江苏省人畜共患病学重点实验室，江苏 扬州 225009,2 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241,1 扬州大学动物科学与技术学院 江苏省人畜共患病学重点实验室，江苏 扬州 225009 |
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| 基金项目： | 江苏省人兽共患病学重点实验室项目 (No. R1510)，上海市科技兴农重点攻关项目 (No. 2015HNG1-9)，江苏省乳品生物技术与安全控制重点实验室课题 (No. K14009) 资助。 |
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| 摘 要： | 金黄色葡萄球菌核酸酶A(Staphylococcal nuclease A,SNA)可用于菌蜕制备中宿主菌的进一步灭活及残存遗传物质的去除。关于SNA在去除了信号肽后是否仍能分泌至胞外以及是否需要融合其他氨基酸片段才能在宿主菌胞质中发挥作用尚存争议。为厘清这一争议,分别构建一系列含SNA、SNA与λ噬菌体cro基因或结核杆菌脲酶基因部分序列的融合片段c SNA或u SNA的温控质粒并对其在大肠杆菌内的作用进行评价。结果显示,SNA、c SNA和u SNA的表达产物对大肠杆菌的4 h灭活率分别为99.9%、99.8%和74.2%。升温诱导30 min后,SNA和c SNA即可在宿主菌胞内被检出,而u SNA需1 h;相较之下,SNA和c SNA在培养液上清中的被检出时间要晚1 h,u SNA则晚2 h。对三者的核酸酶活性检测均为:SNA﹥c SNA﹥u SNA,且胞外活性都显著低于胞内。此外,SNA和c SNA在诱导2 h后即将宿主基因组成功降解,而u SNA则在整个实验期间均未能使宿主基因组完全降解。这表明SNA、c SNA和u SNA的表达产物均具有核酸酶活性,可被动释放至胞外,外源DNA片段的融入反而会降低SNA的核酸酶活性。
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| 关 键 词： | 菌蜕，cro基因，裂解基因E，金黄色葡萄球菌核酸酶A，脲酶基因 |
| 收稿时间： | 5/9/2016 12:00:00 AM |
Comparison of effects of staphylococcal nuclease A fused with different exogenous DNA fragments |
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| Institution: | 1 Jiangsu Key Laboratory of Zoonosis, College of Animal Science and Technology, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China,1 Jiangsu Key Laboratory of Zoonosis, College of Animal Science and Technology, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China,1 Jiangsu Key Laboratory of Zoonosis, College of Animal Science and Technology, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China,2 Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China and 1 Jiangsu Key Laboratory of Zoonosis, College of Animal Science and Technology, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | bacterial ghosts cro gene lysis gene E staphylococcal nuclease A urease gene |
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