粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体α链(GM-CSFRα)的克隆与表达 |
| |
引用本文: | 李福胜, 王智峰, 贡慧宇, 张智清, 侯云德,.粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体α链(GM-CSFRα)的克隆与表达[J].生物工程学报,1996,12(Z1). |
| |
作者姓名: | 李福胜 王智峰 贡慧宇 张智清 侯云德 |
| |
作者单位: | 中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室; |
| |
摘 要: | GM-CSF高亲和力受体至少由两条链组成,低亲和力的α链及无结合力活性的β链。本文采用RT-PCR的方法,从GM-CSF依赖细胞株TF-1中克隆了全长的GM-CSFRα链Cdna(包括信号肽部分),经酶切及全基因测序鉴定,并分别在原核及真核细胞表达系统中表达。在大肠杆菌中GM-CSFRα以GST融合蛋白形式表达,谷胱甘肽Sepharose4B亲和层析纯化融合蛋白。GSTCSFRαC无受体活性,推测主要与缺乏翻译后修饰有关。将全基因克隆入真核表达载体Psvl中,转染COS-7细胞瞬时表达以重建GM-CSF的低亲和力受体,125IGM-CSF平衡结合实验证明转染后的COS-7细胞膜上有受体的表达,Crosslinking显示表达的受体α链分子量略低于TF-1细胞。胞外区基因(CSFRαB)克隆入Psvl构建的Psvl/CSFRαB表达载体,转染COS-7细胞后,Westernblot检测表达细胞上清,有单一的反应带,表达上清有GM-CSF的受体活性。
|
关 键 词: | 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 可溶性受体 GST融合蛋白 COS7细胞 |
|
| 点击此处可从《生物工程学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《生物工程学报》下载免费的PDF全文 |
|