| Streptomyces rimosus M4018 中氧化应激转录抑制因子Rex的克隆表达及与rex 操纵子的体外结合活性 |
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| 引用本文： | 沈晶,唐振宇,肖慈英,郭美锦.Streptomyces rimosus M4018 中氧化应激转录抑制因子Rex的克隆表达及与rex 操纵子的体外结合活性[J].微生物学报,2012,52(1):38-43. |
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| 作者姓名： | 沈晶 唐振宇 肖慈英 郭美锦 |
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| 作者单位： | 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海200237;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海200237;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海200237;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海200237 |
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| 基金项目： | 国家重点实验室开放课题经费(2060204);国家“863 计划”(2007 BAI26B02) |
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| 摘 要： | 【目的】为了研究龟裂链霉菌Streptomyces rimosus M4018中的rex基因对自身rex operator(ROP)的调控机制。【方法】根据天蓝色链霉菌Streptomyces coelicolor A3(2)中rex基因的同源序列设计引物进行PCR,从S.rimosus M4018中获得其rex基因(Sr-rex)。同时,通过染色体步移的方法,获得其上游的ROP序列。采用体外凝胶迁移的方法,分析了Sr-Rex对ROP的调控作用。【结果】获取的Sr-rex基因核苷酸序列长度为846 bp,预测的编码氨基酸序列与S.coelicolor A3(2)中Rex的同源性为84%,获得GenBank登录号:GQ849479。圆二色光谱显示Sr-Rex的结构以α螺旋和β折叠为主,与软件预测相符。凝胶迁移实验表明,Sr-Rex能与S.rimosus M4108中扩增到的ROP片段特异性结合。同时,以Rex:ROP的最小结合序列为基础,设计了一条22 bp的单链DNA片段,和Sr-Rex的最大结合摩尔浓度比约为5:1。高浓度的NADH抑制两者的结合活性,而NAD+对结合没有影响。【结论】在S.rimosus M4108中,Rex是通过响应胞内NAD(H)水平的方式来调控ROP的表达的。
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| 关 键 词： | 龟裂链霉菌 氧化应激 转录抑制因子Rex 基因克隆和表达 凝胶迁移分析 |
| 收稿时间： | 2011/10/10 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2011/11/22 0:00:00 |
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