小鼠小脑颗粒神经元的原代培养与鉴定 |
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引用本文: | 罗道朋,许寒晓,李强明,余资江,贾熙华,李丽娜,于常海,戈果.小鼠小脑颗粒神经元的原代培养与鉴定[J].基因组学与应用生物学,2018(6). |
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作者姓名: | 罗道朋 许寒晓 李强明 余资江 贾熙华 李丽娜 于常海 戈果 |
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作者单位: | 贵州医科大学人体解剖学教研室;北京大学神经科学研究所星形胶质细胞功能研究实验室;北京大学神经科学研究所北京大学基础医学院神经生物学系教育部神经科学重点实验室卫生部神经科学重点实验室;海康生物科技(北京)有限公司 |
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摘 要: | 本研究通过体外分离培养及鉴定原代小鼠小脑颗粒神经元(cerebellar granule neurons,CGNs),为神经科学研究提供原代神经元细胞模型。取生后第7天的ICR乳鼠小脑,在解剖体视镜下剥离脑膜及血管,经刀片切碎、0.25%胰酶消化、移液器吹打、70μm尼龙滤网制备单细胞悬液,差速贴壁后接种于新鲜配置的培养基。倒置相差显微镜观察不同时间CGNs的形态变化。采用神经元的标记蛋白微管相关蛋白-2(microtubule associated protein 2,MAP2),星形胶质细胞的标记蛋白胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP),小胶质细胞的标记蛋白(type 3 complement receptor,CR3/CD11b)进行免疫荧光检测培养的原代CGNs纯度。原代培养CGNs接种20 min后即贴壁良好,培养24 h后细胞伸出突起,培养第7天神经元成熟,形成丰富的轴突,树突和胞间突触连接。经免疫荧光鉴定,CGNs纯度可达95%以上。成功体外分离培养出高纯度的原代CGNs,可应用于CGNs的体外研究。
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