人胸腺素α原cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

采用基因工程方法制取人胸腺素α原获得成功。用２０ｕｇ／ｍｌ植物血球凝集素（ＰＨＡ）和５００Ｕ／ｍｌ重组人白细胞介素２（ＩＬ－２）联合刺激人胎儿胸腺细胞，从中提取总ＲＮＡ，经反转录ＰＣＲ获得了人胸腺素α原ｃＤＮＡ；将之克隆入ｐＵＣ１９中，序列测定表明与已报道序列一致，进一步将之亚克隆入原核表达载体ｐＢＶ２２０，转化大肠杆菌ＤＨ５ａ．观察到在不改变氨基酸编码的前提下，增加胸腺素ａ原上游引物中Ａ、Ｔ含量，可以明显提高胸腺素α原的表达量，同时，不同培养基对它的表达也有影响。胸腺素α原在大肠杆菌中以可溶形式表达，不需复性。初步活性测定显示，它可明显刺激人外周血淋巴细胞Ｅ－玫瑰花结形成率。重组人胸腺素α原在大肠杆菌中表达，为其临床应用及基础研究奠定了基础。