构建抑制NF-κB信号通路的药物筛选模型

NF—κB已被证明在肿瘤和炎症过程中起到至关重要的作用。因此，建立抑制NF-κB信号通路的药物筛选模型至关重要。利用荧光素酶报告基因技术与蛋白印迹技术分别探索TNFα处理浓度及时间对NF-κB报告基因表达和NF—κB抑制亚单位It〈Bα降解的影响，进而构建NF—κB信号通路抑制剂药物筛选模型。实验结果表明，0．01nmol／LTNFα作用24h即能刺激HEK293T细胞中NF—κB报告基因较高水平的表达，且其表达量与TNFα的剂量和处理时间呈正相关性；0．01nmol／LTNFα作用5min即能使Panc-28细胞中IκBα明显降解，20min～30min几乎降解完全，之后IκBα含量又开始增加。NF-κB阳性抑制剂藤黄酸验证表明NF-κB萤光素酶报告基因检测筛选体系和NF—κB抑制亚单位降解筛选体系两种体系稳定可行。结果证明，两种模型可以用于NF—κB信号通路抑制剂药物的筛选。