| 嗜热古菌Thermofilum adornatum来源的高温热激活β-葡萄糖苷酶TaBgl3的原核表达及酶学性质研究 |
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| 作者姓名： | 沈风飞 缪婷婷 张晓晓 尹爱国 石鹏君 徐波 |
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| 作者单位： | 江西农业大学生物科学与工程学院, 江西 南昌 330045;广东石油化工学院生物与食品工程学院, 广东 茂名 525000;中国农业科学院农产品加工研究所, 北京 100193 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31760438,32072166);广东省自然科学基金(2019A1515011696);茂名市科技项目(mmkj2020011);中国农业科学院农产品加工研究所"N专项"(CAAS-ASTIP-2021-IFST-SN2021-11) |
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| 摘 要： | 【目的】β-葡萄糖苷酶,又称β-D-葡萄糖苷水解酶,属于纤维素酶类,是一种降解纤维素的关键限速酶。来源于嗜热古菌的β-葡萄糖苷酶已被广泛验证具有酸性高温等特性,已成为高温酶的研究热点之一。本文对尚未报道的来源于嗜热古菌中一种热丝菌（Thermofilum adornatum）的GH3家族的葡萄糖苷酶,进行了原核表达和酶学性质测定,以期找到更优的β-葡萄糖苷酶。【方法】从NCBI数据库中获得了嗜热古菌（T.adornatum）来源的GH3氨基酸序列,构建重组质粒p ET-30a（+）-TaBgl3,并在大肠杆菌（Escherichia coli） BL21（DE3）感受态细胞中诱导表达重组蛋白;采用磁珠纯化,研究其酶学性质。【结果】重组蛋白TaBgl3的分子量为77.0 kDa;酶学性质结果表明,其最适反应条件为80°C和pH 5.0,在70°C保温处理1–4 h,对TaBgl3的酶活力有促进作用,在最适温度80°C处理2 h后,其激活作用更加明显,能提高40%以上的酶活;其在pH 5.0–8.0下37°C保温1 h,仍具有60%以上的活性;底物为对硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷（p NP...
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| 关 键 词： | 嗜热古菌 GH3β-葡萄糖苷酶 高温热激活酶 热稳定性 |
| 收稿时间： | 2021-10-20 |
| 修稿时间： | 2022-01-27 |
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