表达具有热稳定肠毒素Ⅱ免疫原性融合蛋白菌株的构建

将热稳定肠毒素I(ST I)基因的SfaNI—Fnu4HI的限制性片段经进一步加工，插入到 一个“open reading frame”载体的合适位点中，形成一个阅读框架正确的ompF—est—lacz杂种结构基因。该杂种基因在ompF启动子的控制之下，产生一种具有β-半乳糖苷酶活性的杂种融合蛋白。我们获得了一些具有酶活性、DNA杂交阳性的转化子。对其中一个，TKl046(pPH 14)，作了进一步研究。经限制性内切酶分析和DNA序列分析，证明STII基因在重组DNA中连接方向是正确的，其连接处的碱基排列序列。STII基因及其相对于1acZ的阅读框架也是正确的。我们还纯化了该重组体表达的融合蛋白，并获得了高滴度的抗融合蛋白抗体。动物实验结果表明，该抗体能显著中和天然STII肠毒素的毒性作用。