| 人冠状病毒NL63受体结合区蛋白的原核表达纯化与鉴定 |
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| 引用本文： | 常慧,伊瑶,赵敏,周为民,赵国霞,王慧娟,毕胜利,高基民,刘冰,谭文杰.人冠状病毒NL63受体结合区蛋白的原核表达纯化与鉴定[J].病毒学报,2013(2):106-111. |
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| 作者姓名： | 常慧 伊瑶 赵敏 周为民 赵国霞 王慧娟 毕胜利 高基民 刘冰 谭文杰 |
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| 作者单位： | 吉林大学白求恩医学院遗传学系;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;温州医学院医学病毒学研究所 |
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| 基金项目： | 国家863课题(2007AA02Z464);传染病重大专项(2008ZX10004-014) |
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| 摘 要： | 人冠状病毒NL63受体结合区蛋白是其免疫学诊断和疫苗研究的主要靶点,在受体吸附、病毒进入细胞及膜融合中起关键作用。本研究在E.coli系统中进行人冠状病毒NL63受体结合区(RBD)大、小蛋白的表达纯化,并对其进行免疫学鉴定。首先密码子优化设计合成了HCoV-NL63的RBD大片段(RL:232-684aa)与小片段(RS:476-616aa)的编码基因,并将其克隆进硫氧还蛋白表达载体pM48,构建了人冠状病毒NL63的受体结合区蛋白(RBD)大(RL)、小(RS)片段与硫氧还蛋白的融合表达质粒;转化E.coli BL21pLys S,利用IPTG进行诱导表达,用镍亲和层析对蛋白进行纯化,并以表达HCoV-NL63RL与RS蛋白的重组痘苗病毒免疫小鼠血清对重组蛋白进行免疫印迹鉴定。结果表明在37℃,0.8mM IPTG诱导4h时,蛋白表达量达到最高,融合蛋白主要以包涵体形式表达,纯化后纯度可达95%以上。Western blot显示,两个融合蛋白均与痘苗病毒(天坛株)表达的HCoV-NL63RL与RS蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应。本研究首次在国内用原核系统表达纯化并鉴定了人冠状病毒NL63受体结合区大小蛋白(RL和RS),为人冠状病毒NL63感染的免疫学检测与疫苗研究提供了基础。
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| 关 键 词： | HCoV-NL63 受体结合区蛋白 重组蛋白 表达 大肠杆菌 |
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