利用RT-LAMP可视化检测技术检测H1亚型禽流感病毒及N1、N2亚型的分型 |
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引用本文: | 彭宜,谢芝勋,郭捷,周辰瑜,刘加波,庞耀珊,邓显文,谢志勤,谢丽基,范晴,罗思思.利用RT-LAMP可视化检测技术检测H1亚型禽流感病毒及N1、N2亚型的分型[J].病毒学报,2013(2):154-161. |
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作者姓名: | 彭宜 谢芝勋 郭捷 周辰瑜 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 谢丽基 范晴 罗思思 |
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作者单位: | 广西兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室;广西大学动物科学技术学院 |
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基金项目: | 广西特聘专家专项经费资助项目(2011B020);广西自然科学基金面上项目(2011GXNSFA01 8088);广西基本科研业务费专项项目(桂兽研专项09-2) |
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摘 要: | 为直接根据颜色变化进行可视化检测H1亚型、N1亚型、N2亚型禽流感病毒(AIV),根据环介导等温扩增技术(LAMP),建立针对H1亚型AIV及特异性鉴定N1、N2亚型的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。根据GenBank中的AIV基因序列,设计了三套分别针对H1亚型AIV-HA基因及N1、N2亚型AIV-NA基因的特异性简并引物,并优化反应条件和体系。结果表明建立的检测方法对其它亚型AIV及禽呼吸道病原体无交叉扩增反应并能特异性地检测N1、N2亚型AIV,灵敏度优于传统的RT-PCR方法。整个反应在常规水浴中50min就可完成,反应结束后不需打开反应管盖,可根据反应液的颜色变化对结果直接进行判定。120份临床样品用建立的RT-LAMP方法检测到14份H1N1亚型AIV、8份H1N2亚型AIV,结果与病毒分离结果相符。本研究建立的三种RT-LAMP可视化检测技术特异、灵敏、快速、操作和结果判定简便,适合在基层进行H1亚型AIV的快速检测及N1、N2亚型AIV的分型。
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关 键 词: | 逆转录环介导等温扩增 可视化检测 H1、N1、N2亚型禽流感病毒 |
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