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| Adiponectin 基因剔除LacZ基因敲入小鼠模型的建立 | |
| 引用本文： | 任维华,李西华,王 芳,乔建瓯,党素英,孔 辉,王 龙,陆顺元,孙 霞,徐国江,傅继梁,费 俭,王铸钢.Adiponectin 基因剔除LacZ基因敲入小鼠模型的建立[J].生物化学与生物物理进展,2006,33(9):846-853. |
| 作者姓名： | 任维华 李西华 王 芳 乔建瓯 党素英 孔 辉 王 龙 陆顺元 孙 霞 徐国江 傅继梁 费 俭 王铸钢 |
| 作者单位： | 1. 上海交通大学医学院医学遗传学教研室,上海,200025;上海南方模式生物研究中心,上海,201203 2. 上海交通大学医学院医学遗传学教研室,上海,200025 3. 上海南方模式生物研究中心,上海,201203;上海交通大学医学院附属瑞金医院内分泌科,上海,200025 4. 上海南方模式生物研究中心,上海,201203 5. 上海南方模式生物研究中心,上海,201203;上海交通大学医学院附属瑞金医院医学基因组学国家重点实验室,上海,200025 6. 上海交通大学医学院附属瑞金医院医学基因组学国家重点实验室,上海,200025 7. 上海交通大学医学院医学遗传学教研室,上海,200025;上海南方模式生物研究中心,上海,201203;上海交通大学医学院附属瑞金医院医学基因组学国家重点实验室,上海,200025 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金;国家高技术研究发展计划(863计划);上海市科技发展基金;上海市教委E-研究院建设计划项目基金 |
| 摘 要： | adiponectin是脂肪细胞特异分泌的一种活性蛋白质,具有增加胰岛素敏感性、抗炎及抗动脉硬化等活性.建立adiponectin基因剔除β-半乳糖苷酶基因(LacZ)敲入小鼠模型,可为整体动物水平研究adiponectin基因功能及其表达调控机制等提供理想工具.根据生物信息学方法获得adiponectin基因组序列,设计基因剔除及敲入策略,在adiponectin基因第2和第3号外显子剔除的同时,在其ATG和信号肽序列后顺接LacZ基因完整编码序列,构建完成了Adipo-LacZ-XpPNT基因剔除质粒.通过电穿孔将打靶质粒转入ES细胞,以G418和ganciclovir进行药物筛选,获得药物抗性的ES细胞克隆,PCR和DNA印迹鉴定出正确同源重组克隆.将同源重组的ES细胞克隆注入小鼠囊胚得到嵌合体小鼠,嵌合体小鼠与C57BL/6J小鼠交配产生杂合子小鼠,杂合子间交配获得adiponectin基因剔除LacZ基因敲入纯合子小鼠.经RT-PCR、RNA印迹和ELISA检测证实纯合子小鼠脂肪和血清中adiponectin基因表达呈阴性.RT-PCR、RNA印迹及蛋白质印迹检测发现,LacZ基因在突变小鼠脂肪组织中有特异性表达,其表达谱与内源性adiponectin基因的表达谱一致.但在脂肪组织及外周血中未能检测到LacZ活性,且血清中LacZ蛋白亦呈阴性.由此成功建立了adiponectin基因完全灭活及LacZ基因以内源性adiponectin基因表达谱表达的小鼠模型,为进一步研究该基因功能及其表达调控创造了有利条件. |
| 关 键 词： | adiponectin 基因剔除 β-半乳糖苷酶基因(LacZ) 基因敲入 |
| 收稿时间： | 02 13 2006 12:00AM |
| 修稿时间： | 6/30/2006 1:13:46 PM |
Generation of Adiponectin Gene Knock-out and LacZ Gene Knock-in Mouse Model |
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| REN Wei- Hu,LI Xi-Hu,WANG Fang,QIAO Jian-Ou,DANG Su-Ying,KONG Hui,WANG Long,LU Shun-Yuan,SUN Xi,XU Guo-Jiang,FU Ji-Liang,FEI Jian and WANG Zhu-Gang.Generation of Adiponectin Gene Knock-out and LacZ Gene Knock-in Mouse Model[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2006,33(9):846-853. | |
| Authors: | REN Wei- Hu LI Xi-Hu WANG Fang QIAO Jian-Ou DANG Su-Ying KONG Hui WANG Long LU Shun-Yuan SUN Xi XU Guo-Jiang FU Ji-Liang FEI Jian and WANG Zhu-Gang |
| Institution: | 1 Department of Medical Genetics, Shanghai Jiontong University Medical School, Shanghai 200025, China; 2 |
| Abstract: | |
| Keywords: | adiponectin gene knockout LacZ gene knock-in |
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