电场诱导营养缺陷型酵母原生质体的融合

本文以酿酒酵母营养缺陷型单倍体菌株； Jz-25，a，ura。和Jz-22，a，trp’ade一的原生质体为材料，采用改进的大尺寸电融合小池，以频率为1MHz，强度为450V／cm的正弦交变电场作电介质电泳，使原生质体沿电力线方向排列成串，建立起质膜间的紧密接触；接着以高强度4．5kv／cm、短时程40μs的Rc放电脉冲触发并列质膜的可逆电击穿，引起膜的通透性瞬时增大，从而导致原生质体的融合．为了进一步增大从电极间取出的融合体数目，而克服由于增高交变电场引起的使溶液过热的副作用，实验中还设计了以PEG聚集原生质体后，加高强度7．0kv／cm短时程45μs的可逆电击穿脉冲触发融合的程序。实验结果表明；上述两种电融合程序的融台频率都要比以相同材料所作的纯PEG对照实验的融合频率有所提高。通过对融合产物作交配型检验和测量细胞的尺寸，初步可以证明融合子在质融后已发生核配，产生出二倍体菌株。看来细胞电融台方法可成为一种实际应用的技术。