| 乙酰化修饰调控结核杆菌异柠檬酸裂合酶的研究 |
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| 引用本文： | 李瑶瑶,毕静,王艺红,秦云贺,张雪莲. 乙酰化修饰调控结核杆菌异柠檬酸裂合酶的研究[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(6): 8-13. DOI: 10.13523/j.cb.20150602 |
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| 作者姓名： | 李瑶瑶 毕静 王艺红 秦云贺 张雪莲 |
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| 作者单位： | 复旦大学 生命科学学院 遗传工程国家重点实验室 上海 200433 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(81261120558、30901828) |
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| 摘 要： | 目的:探索结核杆菌异柠檬酸裂合酶(ICL)蛋白322位点赖氨酸(Lys322)的乙酰化修饰对蛋白功能的调控作用。方法:构建结核杆菌ICL蛋白原核表达载体p ET28a-icl,并对Lys322位点进行定点突变为精氨酸(Arg,R)和谷氨酰胺(Glu,Q),体外表达纯化获得重组蛋白ICLWT、ICL322R和ICL322Q。通过Western blotting和酶活性测定来揭示Lys322位点突变前后对蛋白的乙酰化修饰水平及蛋白功能的影响。结果:Western blotting检测发现大肠杆菌表达体系获得的ICLWT、ICL322R和ICL322Q蛋白均有较高水平的蛋白赖氨酸乙酰化修饰信号,较ICLWT,ICL322R和ICL322Q突变蛋白的酶活性分别下降了大约50%和70%。结论:在大肠杆菌的表达体系中,ICL蛋白可以获得乙酰化修饰。ICL322Q突变蛋白酶活性的显著下降,揭示Lys322位点乙酰化修饰对ICL蛋白的功能存在负向调控。为未来深入探索赖氨酸乙酰化修饰对结核杆菌代谢,潜伏感染的调控作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 异柠檬酸裂合酶 乙酰化修饰 定点突变 |
| 收稿时间： | 2015-03-13 |
Lysine-322 Acetylation Negatively Regulates Isocitrate Lyase of Mycobacterium tuberculosis |
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| LI Yao-yao,BI Jing,WANG Yi-hong,QIN Yun-he,ZHANG Xue-lian. Lysine-322 Acetylation Negatively Regulates Isocitrate Lyase of Mycobacterium tuberculosis[J]. China Biotechnology, 2015, 35(6): 8-13. DOI: 10.13523/j.cb.20150602 |
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| Authors: | LI Yao-yao BI Jing WANG Yi-hong QIN Yun-he ZHANG Xue-lian |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Isocitrate lyase acetylation site-directed mutagenesis |
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