| 猪髓样分化因子MyD88特异性shRNA干扰载体的构建筛选及干扰效果评价 |
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| 引用本文： | 宗鑫,胡汪洋,汪以真.猪髓样分化因子MyD88特异性shRNA干扰载体的构建筛选及干扰效果评价[J].中国生物工程杂志,2015,35(7):1-7. |
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| 作者姓名： | 宗鑫 胡汪洋 汪以真 |
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| 作者单位： | 浙江大学饲料科学研究所 农业部动物营养与饲料重点开放实验室 浙江省饲料及动物营养重点实验室 杭州 310029 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上资助项目(31172213) |
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| 摘 要： | 髓样分化因子My D88(myeloid differentiation factor 88)信号通路是一个具有多种调节功能的传导通路,在免疫反应、炎症反应及肿瘤的发生和发展过程中均发挥重要作用。构建猪(Sus scrofa)My D88基因的shRNA干扰载体,并在转录水平和蛋白质表达水平对其干扰效果进行验证,以筛选出干扰效果最优的干扰载体。根据猪My D88基因(Gen Bank登录号:KC766424.1)全长c DNA序列,利用Invitrogen公司在线设计软件设计出4对shRNA干扰序列,退火成双链后,分别将其插入到p Yr-1.1载体中,构建My D88基因的shRNA真核表达载体p Yr-1.1-pig My D88-sh1、p Yr-1.1-pig My D88-sh2、p Yr-1.1-pig My D88-sh3、p Yr-1.1-pig My D88-sh4,并通过双酶切和测序对其进行鉴定。构建成功后转染猪肺泡巨噬细胞3D4/2,通过Real-time PCR及Western blot验证My D88基因的表达水平,以及对LPS刺激后炎症因子TNF-α基因表达水平的影响。结果表明,所构建的猪My D88基因的特异性shRNA表达载体均可显著降低猪My D88 mRNA和蛋白质的表达水平(P0.05),干扰效率分别达到36%、67%、60%、69%;相比于未干扰组,LPS刺激My D88沉默之后的巨噬细胞,炎症因子TNF-α基因表达水平显著下降(P0.05),表明所构建猪My D88干扰载体干扰效果较好。
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| 关 键 词： | 猪 髓样分化因子MyD88 载体构建 干扰效果 |
| 收稿时间： | 2015-03-23 |
Construction and Evaluation of Porcine Myeloid Differentiation Factor 88 (MyD88) shRNA Interference Vector |
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| ZONG Xin,HU Wang-yang,WANG Yi-zhen.Construction and Evaluation of Porcine Myeloid Differentiation Factor 88 (MyD88) shRNA Interference Vector[J].China Biotechnology,2015,35(7):1-7. |
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| Authors: | ZONG Xin HU Wang-yang WANG Yi-zhen |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Porcine Myeloid differentiation factor 88 (MyD88) Construction of expression vector Interference effect |
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