| HE4荧光素酶报告基因载体构建与鉴定及其在肾脏纤维化中的作用 |
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| 引用本文： | 张 磊,刘利敏,刘 婷,张玉明,孙世仁.HE4荧光素酶报告基因载体构建与鉴定及其在肾脏纤维化中的作用[J].现代生物医学进展,2017,17(31):6006-6009. |
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| 作者姓名： | 张 磊 刘利敏 刘 婷 张玉明 孙世仁 |
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| 作者单位： | 第四军医大学第一附属医院肾脏内科 陕西 西安710032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(81400699) |
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| 摘 要： | 目的:通过构建HE4荧光素酶报告基因载体以及质粒转染以分析HIF-1α对HE4靶向调控,明确HE4调控肾脏纤维化的分子机制。方法:采用巢式PCR扩增HE4启动子片段,纯化酶切后定向克隆进p GL-3basic报告基因载体,进而与PRL-TK质粒共转染HK2细胞,检测荧光素酶的表达HIF-1α过表达质粒转染HK2细胞,western blot检测HE4分子的表达。HK2细胞转染HE4过表达质粒后检测COL4A1、COL1A1分子的表达。结果:获得HE4启动子荧光素酶报告载体,酶切鉴定结果与初期预测一致,荧光素酶检测结果证实HIF-1α可结合于HE4启动子上,从而启动HE4的表达。HK2细胞转染HIF-1α正义过表达质粒,HE4的m RNA和蛋白水平均显著增加。HK2细胞转染HE4过表达质粒,COL4A1、COL1A1表达水平上调。结论:本研究成功构建HE4启动子荧光素酶报告基因载体,证实HIF-1α为HE4上游靶基因,过表达的HE4可能通过上调COL4A1、COL1A1促进细胞外基质沉积促进肾脏纤维化的发生发展。
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| 关 键 词： | 人附睾蛋白4 荧光素酶 重组质粒 肾脏纤维化 |
| 收稿时间： | 2017/5/17 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2017/6/13 0:00:00 |
Construction and Identification of Luciferase Reporter Vector for HE4 Promoter and the Role of HE4 in the Renal Fibrosis |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | HE4 Luciferase Recombinant plasmid Renal fibrosis |
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