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结核杆菌Hsp65 与人IL-2 融合蛋白在耻垢杆菌表达
引用本文:王丽梅 师长宏 柏银兰 张海 康健 张薇 徐志凯. 结核杆菌Hsp65 与人IL-2 融合蛋白在耻垢杆菌表达[J]. 现代生物医学进展, 2011, 11(18): 3405-3407
作者姓名:王丽梅 师长宏 柏银兰 张海 康健 张薇 徐志凯
作者单位:1. 第四军医大学基础部微生物学教研室 陕西西安710032
2. 第四军医大学实验动物研究中心 陕西西安710032
基金项目:国家自然科学基金,“十一五”传染病重大专项项目
摘    要:
目的:构建能够分泌表达结核分枝杆菌热休克蛋白65(Hsp65)与人IL-2融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌(recombinant Mycobacterium Smegmatis,rMs)。方法:用EcoRⅤ和HindⅢ双酶切含Hsp65-IL-2融合基因的pPRO-hsp65-IL-2载体,回收目的基因片断Hsp65-IL-2,并将其亚克隆入同样双酶切的大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭分泌表达载体pDE22中。重组质粒pDE22-hsp65-IL-2酶切鉴定正确后,电穿孔转化MS感受态,潮霉素抗性压力筛选阳性rMs。Western-blot鉴定rMs培养上清蛋白中目的蛋白的表达。结果:重组pDE22-hsp65-IL-2质粒酶切后可获得约2000 bp片段,与预期大小一致。Western-blot结果表明,rMs培养上清蛋白中有特异性反应条带,大小为78kD,与Hsp65-IL-2融合蛋白大小相一致。结论:成功构建了大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭分泌表达载体pDE22-hsp65-IL-2,为该rMs的免疫学特性及抗结核分枝杆菌感染的保护效果研究奠定了基础。

关 键 词:结核分枝杆菌  HSP65  IL-2  耻垢分枝杆菌

Expression of Heat Shock Protein 65 of Mycobacterium Tuberculosis andHuman IL-2 Fused Gene in Mycobacterium Smegmatis
WANG Li-mei,SHI Chang-hong,BAI Yin-Lan,ZHANG Hai,KANG Jian,ZHANG Wei,XU Zhi-kai. Expression of Heat Shock Protein 65 of Mycobacterium Tuberculosis andHuman IL-2 Fused Gene in Mycobacterium Smegmatis[J]. Progress in Modern Biomedicine, 2011, 11(18): 3405-3407
Authors:WANG Li-mei  SHI Chang-hong  BAI Yin-Lan  ZHANG Hai  KANG Jian  ZHANG Wei  XU Zhi-kai
Affiliation:WANG Li-mei1,SHI Chang-hong2,BAI Yin-Lan1,ZHANG Hai2,KANG Jian1,ZHANG Wei1,XU Zhi-kai1(1 Department of Microbiology,School of Basic Medicine,2 Laboratory Animal Research Center,the Fourth Military Medical University,Xi'an 710032,China)
Abstract:
Keywords:Mycobacterium tuberculosis  HSP65  IL-2  Mycobacterium Smegmatis  
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